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仿制药杂质检查方法建立和方法学研究与评价


仿制药杂质检查方法建立和方法 学研究与评价

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主要内容
? 一、概述 ? 二、杂质检查方法的建立 ? 三、杂质检查方法学验证的要求 ? 四、杂质检查方法和方法验证常见问题分 析

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一、概述
? ? ? ? ? ? ? 1、杂质检查方法和方法验证对仿制药的重要意义 (1)安全性的重要保证--关注毒性杂质 (2)评价仿制药是否一致的关键指标之一 --仿制药与被仿制药的质量一致 --杂质的种类和数量不高于被仿制药 (3)杂质研究的基础 --杂质检查方法不合适或方法学验证不完善, 杂质检查不可靠,无法准确评价药品质量

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一、概述

? 仿制药与被仿制药一致性要求 ? 药学方面一致(含量、结构、杂质、其他检查项等) ? 杂质的数量和种类低于被仿制药,否则需要分析杂质的安 全性并提供有关数据,必要时应进行相关的安全性试验 ? 建立杂质适宜的杂质检查方法用于判断一致性 ? 用语工艺优化、去除杂质、考察稳定性、控制药物质量

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一、概述

? 2、目前国内仿制药研究中杂质检查面临的困难 ? --杂质来源不清:被仿制药和仿制药杂质的种 类和数量不清,包括杂质产生和引入的过程、降 解途径 ? --杂质甲醇方法缺乏针对性:不知控制何种杂 质以及为何控制,缺乏安全性数据的支持 ? --杂质对照品制备困难(受限于工艺困难): 方法验证不充分 ? --杂质检查结果难于评价:以及基础薄弱,需 要提高杂质研究水平,包括杂质检查方法和验证 水平,以体改仿制药研制水平
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一、概述

? 例 盐酸曲美他嗪片 ? --进口标准采用梯度洗脱,对3种已知杂 质、单个未知杂质及总杂质分别进行控制 ? --国内仿制采用等度洗脱,仅对未知杂 质(单个杂质和/或总杂质进行控制) ? --国内同品种标准对有关物质的规定: 总杂质不得过1.0%

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一、概述

3、主要的技术指导原则和技术要求 《化学药物杂质研究的技术指导原则》 《已有国家标准化学药品研究技术指导原则》 过渡期品种集中审评(化学药品)技术要求 FDDA、ICH的相关指导原则 -Guidances for Industry Guidances ANDAs:Impurities in Drugs Substances Chemistry、Manufacturing、Controles Information ? -ANDAs:Impurities in Drugs Products ? Q3A(R) ? Q3B(R)
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一、概述

? 4、杂质的范围 ? 有机杂质--包括工艺中引入的杂质和降 解产物,化学结构与活性成分的分子式类 似或具渊源关系,通常称有关物质 ? 无机杂质--产生的无机物 ? 残留溶剂--生产过程中使用的有机溶剂 ? ? 来源--工艺杂质、降解产物、从反应物 及试剂中混入的杂质(外源性杂质)等 ? 结构杂质--几何异构体、光学异构体、 聚合物、其它甾体、其它氨基酸

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二、杂质检查方法的建立
? 目的 ? 1、建立杂质检查方法是质控的要求 ? --包括具体的分析操作方法,以及计算 方法、限度要求 ? 2、用语分析杂质谱 ? --考察与被仿制药一致性,进而优化制 备工艺及稳定性考察

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二、杂质检查方法的建立

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1、杂质检查方法建立的前提 -(1)被仿制药杂质谱如何: 参考公开信息:质量标准、说明书、有关文献和专利 -(2)自身杂质如何? 理论综合分析(合成路线、反应条件、处方工艺、辅 料等)、直接测试 用于未知杂质或未定性杂质的“标记”方法 -LC-MS/GC-MS或CE-MS法 -HPLC峰保留时间对比法 -其它方法
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二、杂质检查方法的建立

? 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 ? (1)参考被仿制药的方法: ? A、被仿制药杂质检查方法和限度如何?标准中控制了 哪些杂质? ? B、重要参考,为方法建立提供重要的信息,全面考察 ? C、不可简单套用 ? -工艺或处方的不同,二者的杂质谱可能不同,被仿 制药杂质加查方法可能不适 ? -被仿制药标准较低,无杂质检查项或较为简单 ? -被仿制药的杂质检查方法无法获得
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二、杂质检查方法的建立

? 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 ? (2)结合杂质的理化特点: ? 根据杂质谱,考虑杂质结构、理化性质 ? 例如: ? 阿司匹林→比色法→游离水杨酸(CP2005) ? 葡萄糖注射液→UV法→5-羟甲基糠醛 (CP2005) ? 氨基酸原料药→TLC法→其它氨基酸(CP2005)
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二、杂质检查方法的建立

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2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 (3)结合杂质的毒性特点: 安全性控制的需要 被仿制药和自身杂质的毒性如何?重视药理毒理及临床安全性 研究结果的作用 对于有些分子通过以下化学反应可能产生潜在的遗传毒性作用 -烷基化 -交联 -脱嘌呤 可参考遗传毒性库 遗传毒性杂质或具有可能引起遗传毒性的结构的杂质需要建立 灵敏的试验方法 -EMEA《遗传毒性杂质限度指导原则》:毒理学担忧阈值 (TLC)1.5mg/人/日
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二、杂质检查方法的建立

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2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 (4)考虑不同检查方法的特点: 主要是灵敏度和专属性能否符合要求 痕量杂质和遗传毒性杂质的严格控制,对方法要求较 高 -化学法&TLC法&HPLC法 - HPLC/MS,HPLC/荧光 CE法可用于微量样品 GC适用于挥发性杂质检查

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二、杂质检查方法的建立

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2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 (5)注意多种方法联用: 由杂质多样性复杂性和方法局限性所决定 单一方法不能满足多个杂质的检测时,可采用两种以上的方法 互为补充,控制杂质 ? -化学法&色谱法&光谱法&生物检定法 ? - 同一方法采用不同测试条件 如正相HPLC、反相HPLC、不同流动相的反相HPLC等 ? -分离技术于检测手段联用,较为有效,如HPLC、GC、LCMS、GC-MS 、HPLC-PDA、CE 等

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二、杂质检查方法的建立

? 2、仿制药杂质检查方法建立的一般考虑点 ? (6)综合药学的其他研究结果: ? 杂质检查与药物外观色泽、含量等项目间存在密切联 系,如果这些项目发生明显变化,而杂质基本不变时, 应分析原因,关注杂质检查方法的可行性。

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二、杂质检查方法的建立

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3、杂质检查常见方法介绍 HPLC法 -考虑被仿制药的色谱条件 -考察同类物质质量标准中的杂质检查方法 -一般选择多种色谱条件:正相和反相 -方法包括:固定相、流动相、洗脱方式、波长、测 试样品的处理、具体操作、计算方法

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二、杂质检查方法的建立

? 3、杂质检查常见方法介绍 ? (1)固定相的选择 ? -根据特征研究的药物的特性选择合适填料的柱子。常用RPHPLC,色谱柱多选C18柱、C8柱、苯基柱、氨基柱也有使用 ? -C18柱时,流动相有机溶剂%通常≥5% ? -流动相的pH值2~8 ? -pH>8,溶解硅胶载体,宜选用耐碱填充剂,包覆聚合物、 高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶、非硅胶或有 机-无机杂化填充剂 ? -pH<2,键合相水解脱落,宜选用耐酸性填充剂:有机-无机 杂化填充剂、具有大体积侧链的二异丙基或二异丁基取代C18 键合硅胶等
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二、杂质检查方法的建立

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3、杂质检查常见方法介绍 (1)固定相的选择 -注意不同品牌柱子在耐用性方面的研究: a、当杂质峰与主峰的分离情况不十分完美 b、确定辅料峰的相对保留时间(用于定位扣除辅料的 干扰) ? c、确定特定杂质的相对保留时间 ? d、确定有关物质出峰完毕的保留时间 ? --当不同品牌而引起以上各因素不固定时,应在标 准中注明品牌
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二、杂质检查方法的建立

? 3、杂质检查常见方法介绍 ? (2)流动相的选择 ? 尝试多种流动相 ? 结合杂质的性质 ? -手性杂质 ? -无紫外吸收杂质 ? -一般杂质 ? (3)洗脱方式的选择 ? 等度洗脱 ? 梯度洗脱 ? 极性大的化合物可能被掩盖,极性小的化合物难以被洗 脱,甚至保留在柱上,可使用梯度洗脱法
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二、杂质检查方法的建立

? 3、杂质检查常见方法介绍 ? (4)波长的选择 ? -选择的原则是大部分主要杂质与主成分均在此波长 下有吸收:二极管阵列法 ? -无紫外吸收或检测波长处吸收相差较大的多种化合 物,有时在单一检测波长处不能检出 ? -兼顾各杂质吸收情况:特定波长检测特定杂质 ? -必要时,该用其它类型的检测器
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二、杂质检查方法的建立

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3、杂质检查常见方法介绍 (5)样品的处理和配制 -预处理样品考虑 乳膏 提取可能导致的杂质漏检和失真 衍生化处理导致杂质丢失 -样品浓度的影响 浓度高利于杂质检出,但防超载 低浓度样品杂质的检查难题?
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二、杂质检查方法的建立

? 3、杂质检查常见方法介绍 ? (6)杂质的定量计算方法 ? -杂质对照品法 杂质对照品法:定量准确,已知杂质,需用杂质对照品 杂质对照品法 ? -校正因子的主成分自身对照法 校正因子的主成分自身对照法:定量准确,已知杂质,无需 校正因子的主成分自身对照法 长期提供杂质对照品 ? -不加校正因子的主成分自身对照法 不加校正因子的主成分自身对照法:前提是假定杂质与主成 不加校正因子的主成分自身对照法 分的响应因子基本相同,有一定的误差,可用于未知杂质,已 知杂质对主成分的响应因子在0.9~1.1之间 ? -峰面积归一化法 峰面积归一化法:简便,因杂质与主成分响应因子不同,线 峰面积归一化法 性范围不同、仪器对他们的积分精度及准确度不同等因素,有 一定的局限性
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二、杂质检查方法的建立

? 目前定量方法中存在的主要问题 ? -杂质对照品法 杂质对照品法:使用较少 杂质对照品法 ? -主成分自身对照法 主成分自身对照法:较少采用校正因子计算(杂质无法进行归属或杂质对 主成分自身对照法 照品无法得到,校正因子无法计算) ? -常见的是对未知杂质,不加校正因子的主成分自身对照或面积归一化法 (无法准确定量,无法有效检测杂质) ? TLC法 ? -设备和操作简便,一些特定杂质的检查 ? -灵敏度较差、定量不够精确,分离度欠佳,有时无法满足需要 ? -仅限于限度检查(半定量),结合不同原理的检视技术能使各杂质斑点均 可显示,弥补HPLC的不足。 ? -需做好系统实用性试验
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二、杂质检查方法的建立

? 定量方法 ? -限度检查(半定量) 限度检查(半定量) 限度检查 ? -对照品比较法 对照品比较法:已知杂质,对照品 对照品比较法 ? -自身对照法:已知杂质、未知杂质、色调一致 ? -检视技术:显色、荧光、自身颜色 ? LC-MS、GC-MS、GC-IR、CE-MS法 ? -分离技术和鉴别技术联用,为解析化合物的结构提供直接证 据 ? -有助于杂质谱的分析和定性
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三、杂质检查方法学验证的要求
方法验证的目的 ? 考察分析方法十分适用于杂质的检测 和定量 方法验证中面临的困难 ? 杂质谱不清 ? 杂质对照品无法获取 验证的具体要求

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三、杂质检查方法验证的要求

? 1、专属性 ? -指在可能的共存主分存在时,对被分析无物准确测 定的能力 ? -分离度:专属性指标、杂质谱的明确是基础 ? -杂质可得→最难物质分离对得分离试验、粗品中间 体分离试验、辅料与杂质及主成分得分离试验 ? -杂质不可得→强制降解试验、与另一成熟方法比对 ? 峰纯度→二极管阵列、质谱;改变流动相的比例 ? 方法不够专属时,应多个方法予以补充
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三、杂质检查方法验证的要求

降解试验的注意点 --降解程度 --当降解产物、中间体、副产物吸收波长不同时的 处理 --制剂降解破坏 --消除辅料的干扰,当无法避开辅料的干扰时应对 辅料进行定于予以扣除

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三、杂质检查方法验证的要求

破坏性试验 --酸降解:一般采用0.1mol/L~1mol/L的盐酸或硫酸 --碱降解:一般采用0.1mol/L~1mol/L的氢氧化钠溶液 --氧化降解采用合适的过氧化氢溶液 --必要时可以加热或提高浓度 --对高温试验通常温度高于加速试验温度的10℃,如50 ℃ 、 60 ℃ --对于原料药有需要考虑水溶液或混悬液的降解 --考虑在不同pH值条件下的降解 --光照试验可采用4500Lx
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三、杂质检查方法验证的要求

存在的主要问题 (1)主药完全降解,无法对降解产物进行检测 (2)由于选择降解条件强度不够,使药物未能降解,而 误以为药物稳定 (3)不能选择合适的测定方法测定降解产物,使主成分 降解后测定的回收量偏低 (4)未考虑破坏性试验时产生的聚合物

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三、杂质检查方法验证的要求

? 2、灵敏度 ? -试样中能被检测(或定量)的最低量 ? -通常用检测限及定量限表征,可根据直观评价、信 噪比、响应值的标准差和斜率获得。 ? -应满足质控需要 ? -信噪比的方法 ? 3、精密度 ? -在规定的测试条件下,同一个均匀样品经多次取样 测定所得结果之间的接近程度。 ? -重复性、中间精密度、重现性
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三、杂质检查方法验证的要求

? 4、准确度 ? -测定结果与真实值或参考值接近程度 ? -已知杂质:回收率(根据精密度、专属性、线性) 推断 ? -未知杂质:与另一成熟方法比对、根据质量平衡原 理结合含量等结果进行粗略判定,必要时研究几种不 同色谱条件甚至不同测定原理的方法进行比较选用 ? 5、线性 ? -在设计范围内,检测响应值与待测物质量之间成正 比例关系的程度
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三、杂质检查方法验证的要求

? 6、范围 ? -检测方法能达到一定精密度、准确度和线性的高、低浓度或 量的区间 ? -范围应在规定限度的±20%间或定量限至限度的+20%间, 若含量测定和杂质检查同用一套色谱系统,则线性范围应为杂 质限度的-20%至含量限度(上限)的+20% ? 7、耐用性 7 ? -指测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受程度 ? -HPLC:流动相的组成比例及pH值、不同厂家或批号的色谱 柱、柱效、柱温、流速等及被测溶液的稳定性、样品提取的次 数和时间等 建议固定上述测定条件的参数,如柱长、填料的粒度、温度、 流速,甚至品牌
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三、杂质检查方法验证的要求

? 7、耐用性

--TLC:适当改变展开剂比例及pH值,考察耐用性。如对色谱 条件苛刻时,规定最难分离物质对试验。 --较容易忽略
? 8、溶液的稳定性考察 --一般在常温、常光情况下进行,对同一份样品溶液进行长时间的测定,以 杂质量的变化进行考察 --光或温度引起应在标准中说明避光或试验温度 ? 9、系统适用性 --理论板数、柱拖尾因子、难分离物质对的分离、对照溶液重复进样的偏差 --否则,应对色谱系统作必要的调整或更换色谱柱

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四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析
1、简单套用被仿制药的检查方法,未建立针对性的方法 ? 例:盐酸伪麻黄碱,分别采用人工合成与植物提取工艺, 有机溶剂残留量、有关物质均不同 2、方法学验证不充分 ? -强制降解条件过于剧烈,无法判断主峰与降解产物的 分离情况 ? -样品经降解、氧化破坏后主药被完全破坏,无法说明 其降解物与主峰的分离情况 ? -调整降解条件的剧烈程度 3、检查方法对杂质的控制不全面,尤其是对毒性杂质
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四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析
建议的质量保证策略 过程控制:控制合成原料的纯度 终产品控制:检查终产品残留的结构异构体 4、方法灵敏度不够 eg:有关物质检查法的定量限未0.75ng,标准规定杂质限 度不得过1.0%,折算为0.5ng,表明此方法不能有效 检测产品的杂质,需重新建立有效的杂质检测方法

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四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析
5、方法缺乏互补性 eg:(1)合成重要中间体在选定的检测波长处物吸收, 建立的有关物质检测方法无法检测该物质 (2)建立该中间体适宜的检测方法 6、积分时间不充分,不能有效检测杂质 --氧化破坏试验中,主峰保留时间的3倍处,仍有降解 峰出现,色谱图记录至2倍,不能有效检测出有关物质 7、检测波长缺乏针对性 --220nm附近的吸收强度远高于278nm波长处 --提供检测波长选择的依据
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四、杂质检查方法和方法验证常见问题分析
8、供试液制备处理欠妥 eg:(1)有关物质检查中供试验制备经过了碱化、萃取 等复杂的过程,是否会引起产品中有关物质的变化而影 响了检出的结果 (2)供试液的制备经过了固相萃取过程,测定结果可能 难以如实反映产品中的杂质情况

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五、几个问题的讨论
1、复方制剂的杂质研究 -如何进行研究? -主药的稳定性 将不稳定主药的降解产物和主药带进的毒性杂质或含 量较高的杂质(尤其已知杂质)作为杂质研究检测的重 要内容,无法兼顾其它杂质时,首先保证此类杂质的监 控 制药之间的相互作用,应作为复方制剂杂质研究的重点

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五、几个问题的讨论
杂质检测方法的建立 --参考各原料药的杂质研究,并尽量采用杂质对照品法 --参照单方制剂杂质研究,难以实现杂质的检测时,综 合质量研究的其他项目总体把握杂质的控制 进行其中一个成分的杂质检查 总杂质按其中一个成分的峰面积进行自身对照法测定 总杂质按照两个成分的平均峰面积进行自身对照法测定 按照出峰时间段对两个成分的杂质分别进行自身对照法 测定 关键是对杂质的归属和确证
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五、几个问题的讨论
2、多手性中心的手性杂质检查 -方法建立较为困难 -结合中间过程控制杂质(质量研究源于设计) -计算方法 用响应的异构体的对照品的外标法(或用相应的异构体 的对照品定位采用归一化法) 用消旋体的对照品的外标法(或用相应的消旋体的对照 品定位采用归一化法) 采用相对保留时间或以出峰次序定位的归一化法

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六、小结

药品杂质是否被全面准确地控制,直接关系到药品地质 量可控与安全有效 杂质检查依赖于对杂质谱地基础研究 与被仿制药地杂质比较仍是一个难题

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