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Stealth? RNAi or siRNA Transfection
以 6 孔板为例,其余规格的转染见表 1 1 中板,细胞密度为 30-50%适宜。 (含血清,不含抗生素) 注意: 根据转染后细胞检测时间长短决定细胞中板密度,如果转染后需要长时间 后检测,则细胞中板密度适当降低,已避免细胞过度生长导致存活降低。 2 第二天(12 小时后)每个孔转染方式如下: A

将 100pmol siRNA 溶于 250ul Opti-mem 无血清培养基中。 B 将 5ul lipo2000 溶于 250ul Opti-mem 无血清培养基中,混匀室温放置 5min。 C 将 A B 两管混合,放置 20min。 3 转染期间,用 PBS 洗 2 次,将 6 孔板培养基换成 Opti-mem,每孔 1.5ml。将 C 管 mix 加入 6 孔板对应孔中, 6 小时后换成有血清培养基。

Plasmid DNA Transfection
转染时细胞密度越高,转染效率,表达效率也越高,并且可以降低细胞毒性。 1 中板。 (含血清,不含抗生素) 贴壁细胞:第二天待细胞密度达到 90%以上时转染 悬浮细胞:中板后随即转染。 2 转染。 A 将 4ug DNA 溶于 250ul Opti-mem 无血清培养基中。 B 将 10ul lipo2000 溶于 250ul Opti-mem 无血清培养基中,混匀室温放置 5min。 C 将 A B 两管混合,放置 20min。 转染期间,用 PBS 洗 2 次,将 6 孔板培养基换成 Opti-mem,每孔 1.5ml。将 C 管 mix 加入 6 孔板对应孔中, 6 小时换成有血清培养基。

Table 1. Culture Shared reagents DNA transfection RNAi transfection

中板密度*

Culture vessel

Surf. area per well

Vol. of plating medium 100ul

Vol. of dilution medium 2X25ul

DNA

Lipofec tamine ?2000

RNA

Lipofec tamine ?2000

1000-10000 cell/well 0.5-2X105 cell/well 1-3X105 cell/well 2-3X105 cell/well 8-10X105 cell/dish 2-3X106 cell/dish

96-well

0.3cm2

0.2ug

0.5ul

5pmol

0.25ul

24-well

2cm2

500ul

2X50ul

0.8ug

2.0ul

20pmol

1.0ul

12-well

4cm2

1ml

2X100ul

1.6ug

4ul

40pmol

2ul

6-well (35mm) 60mm

10cm2

2ml

2X250ul

4.0ug**

10ul

100pmol

5ul

20cm2

4ml

2X0.5ml

8.0ug***

20ul

200pmol

10ul

10cm

60cm2

15ml

2X1.5ml

24ug

60ul

600pmol

30ul

*:中板密度根据不同细胞不同实验有所不同,这里仅提的数据仅供参考 **:6 孔板细胞质粒转染量 1-2ug 足以。 ***:6cm dish 细胞质粒转染量 4-6ug 足以。


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