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药物分析PPT整理


凡从事药品生产、经营、使用的单 位均应配备相应的执业药师,并以此作 为开办药品生产、经营、使用单位的必 备条件之一。 国家执业药师资格考试分为四个科目: ? ? ? ? 第一章 药物分析学导论 药物 — drug,pharmaceuticals, medicine 用于预防、治疗、诊断疾病和帮助机体恢复正常功能,并规定有适应症或者功能主治、用法和用量的 物质。 药物分类: ? ? ? 化学药: API(Active Pharmaceutical Ingre-dient)及其制剂、抗生素、放射性药品和诊断药品 中药与天然药:中药材、中药饮片、中成药 生物制品:生化药品、血清、疫苗、血液制品、生物技术药物 药事管理与法规 药学(中药学)综合知识与技能 药学(中药学)专业知识(一)药物分析 药学(中药学)专业知识(二) 药剂学 药理学 药物化学

药物分析(狭义) : 运用物理、化学、物理化学或生物 化学的方法和手段研究和解决药品质量 控制的项目和指标限度,从而制定科学、 可控的药品质量标准。是研究与改进药 品质量控制方法的“方法学科” 。 药物分析学(广义) : (一)集成药学、化学、生物学和仪器工程学等的新理论、新方法 (1)药物分析学与药理学结合 发展化学生物学检测方法,基于生物亲合作用(受体、酶、蛋白、细胞、细胞膜、DNA 等)的活 性分子的快速识别与筛选新方法, 在同一系统中以生物活性为检测指标, 同时进行化学成分分离分析研究, 提高寻找和发现生物活性成分的效率与靶向性。 薄层-生物自显影技术: 将薄层色谱分离和生物活性测定相结合进行药物筛选, 操作简单、耗费低、灵敏度和专属性高, 是一快 速测定生物活性的方法。 (2)药物分析学与工学结合 ? ? ? 发展基于传感技术的高内涵药效分析方法(细胞、蛋白、DNA 等) 微电极阵列传感器芯片、微电子复合传感器芯片、纳米细胞传感器等 可同时检测多组细胞生理参数和化学参数,获得细胞的多种响应参数,检测细胞对药物响应的药 理与毒理效应 (3)药物分析学与化学的结合 (4)药物分析学与分子影像学结合

发展基于分子探针和分析仪器的分子成像技术,用于药物分子体内过程和药效或毒性的实时动态 检测、药效分子和生物分子的定位。 (5)药物分析学与仪器分析结合 发展高灵敏度、高通量分析方法 ? ? ? ? ? ? ? ? 同时检测多种生物标志物 抗体-药物结合物(ADC) 微量药物杂质和代谢物 微量中药活性成分 多糖 抗体药物 siRNA 等 ……

(二)发展药物成分分析和药物活性分析方法及相关技术 传统的药物分析大多局限于通过分析药物成分来控制药品质量,现已从以物质为中心转移到与生命科 学的结合。

(三)深入新药研发、药物制造和药品临床使用的各个环节 药物分析学属于生命科学的范畴,其主要的研究领域包括药物研究、工业药学和临床药学。 ? ? ? 药物研发:药物的发现、研究与开发 工业药学:药物生产、流通 临床药学:药物的评价和合理应用

(1)药物分析学在药物研究与开发中的应用 新药需要进行临床前研究、临床试验和上市后的评价。药物分析学不仅仅应用于药品质量与稳定 性研究,更是深入到新药研发的各个阶段。 (2)药物分析学在药物生产过程中的应用 药品的质量 (quality) 不是检验出来的而是生产出来的, 药品质量与生产过程中的每个环节密切相关, 除对终产品如原料和制剂按照质量标准进行质量分析外,制药过程关键工艺的监测、控制对于保证药品质 量至关重要。 过程分析技术 — Process Analytical Technology,PAT

过程分析技术与传统的药物质量控制不同,过程分析常常是动态的、连续的分析,这对于保证药 品质量、缩短生产周期、提高生产能力、保证设备安全、节约各种资源、减小生产中的人为因素、降低生 产风险和提高管理效率具有重要意义。 ? 过程反应分析(in-process reaction analysis) 有助于避免产物分解、 控制催化选择性问题、 水分毒化反应和时间拖长等问题。 一旦产品确定后, 其重要的问题是在生产过程中自始至终确保一致性 ? 过程颗粒分析(in-process particle analysis) 可以帮助解决颗粒大小不均匀、裂缝 、制粒过大或过小、放大不一致性等问题 (3)药物分析学在药品使用中的应用 ? ? 药物的质量好坏,服用是否合理,即药品是否安全、有效,最终还应以临床征象和实际疗效来决 定 为了达到药物使用的安全、合理和有效,对药物及其制剂的体内过程、作用机理及药物效应进行 研究,通过药物分析的手段了解药物在体内数量与质量的变化,获得药物代谢动力学的各种参数 和代谢的机理等信息 ? 有助于对所研究的药物的质量、疗效和安全性做出评估,以及对药物的改进和发展提供依据

临床前药学研究:药物分离或合成工艺的筛选与优化、药物中间体质量控制、药物结构确证、一些生物活性的高通量 药物 分析、临床前药物代谢及其动力学研究、药物制剂处方筛选与质量分析、药物质量及其质量标准研究、药物 研发 稳定性研究、药物杂质和降解产物的分离与结构鉴定等。 制造过程质量控制:应用 PAT 对生产全过程进行质量控制,如各种在线分析技术用于监控反应过程、浓度变化、粉末 药物 干燥过程、颗粒均匀性等;离线分析技术用于检测中间体和最终产品;计算机控制技术和统计分析技术用于 生产 集成制造和生产过程的调控。 临床药学研究:指导合理用药和个体化给药,如临床药物代谢动力学、药品生物利用度和生物等效性、治疗药物浓度 药物 监测(therapeutic drug monitoring, TDM)、临床药物相互作用研究、人体基因型分析、生物标志物测定; 运动 应用 员兴奋剂检测、滥用药物和法医毒物分析等。 1. 基本理论 ? ? ? ? 掌握药品质量控制过程中的分析方法所依据的有关理论、化学反应的原理及基本规律 药物的化学结构、理化性质、存在状态与分析方法选择之间的相互关系 熟练药物及其分解物或代谢物的分离提取方法的原理 了解制药过程分析理论

2. 基本知识 (1)研究开发新药 ? ? ? ? 掌握药物分析方法验证的实验方法、药物鉴别试验、杂质检查和含量测定的基本方法、制剂分析 的特点与基本分析方法 熟悉各类药物的通性,典型药物的特性,一般鉴别试验 掌握杂质检查及其限量、定量计算方法 掌握制订药品质量标准的方法,熟悉中药和生物药的质量控制方法 熟悉生物性样品的前处理技术 熟悉过程分析技术的方法

(2)建立体内药物分析方法 (3)了解制药过程质量控制 3.基本操作 ?

熟练掌握各类仪器的使用

? ? 第 二 章

掌握药物的鉴别分析技术,药物的杂质检查方法 掌握光谱法、色谱法、比色法、比浊法和滴定法等分析技术的操作原理和测定方法等 药品质量控制与分析 方法验证

《药典》是国家监督管理药品质量的法定技术的标准,它和其他法令一样具有法定的约束力。药典是药品 的生产、营销、行政和技术监督管理部门共同遵循的法定技术依据。 一、中国药典 中华人民共和国药典,简称《中国药典》 ,其英文名称为 Pharmacopoeia of The People,s Republic of China,英文简称为 Chinese Pharmacopoeia,缩写为 Ch.P。 现行《中国药典》 :2010 版(第 9 版) 一部:收载中药材及饮片、植物油脂和提取物、成方制剂等; 二部:两部分,第一部分收载化学药品、抗生素、生化药品、放射药品;第二部分收载药用辅料; 三部:收载生物制品 药典组成: 凡例 正文 附录 索引 (一)凡例 解释和使用《中国药典》正确进行质量检定的基本原则。把一些与标准有关的、共性的、需要明 确的问题,以及采用的计量单位、符号与专门术语等,用条文加以规定,以避免在全书中重复说明。其有 关规定具法定约束力。 按内容分类: 名称及编排,项目与要求,检验方法和限度,标准品、对照品,计量,精确度,试药、试液、指示剂, 动物实验,说明书、包装、标签等。 1. 名称与编排 对正文品种中收载的中文药品名称、英文名称、有机药物化学名称的命名,药品化学结构式的书 写、有关内容的编排作出规定。 中文名: 《中国药品通用名称》 英文名: 《国际非专利药品名称》INN 化学名: 《有机化学命名原则》 母体的选定与国际纯粹与应用化学联合会(IUPAC)的命名系统一致 化学结构式:WHO 推荐的“药品化学结构式 书写指南” 2. 项目与要求 对正文中各项目进行说明。如性状项、鉴别项、检查项、含量测定项、贮藏项等。 例《中国药典》规定的“阴凉处”是指 A. 放在阴暗处,温度不超过 2℃ B. 放在阴暗处,温度不超过 10℃ C. 避光,温度不超过 20℃ D. 温度不超过 20℃ E. 放在室温避光处 例 药品的近似溶解度以下列名词表示 A. 极易溶解 C. 微溶 B. 几乎不溶或不溶 D. 溶解 E. 略溶

1. 系指溶质 1g(ml)在溶剂 10000ml 中不能完全溶解(B) 2. 系指溶质 1g(ml)能在溶剂 100~不到 1000ml 中溶解(C) 3. 系指溶质 1g(ml)能在溶剂不到 lml 中溶解(A) 4. 系指溶质 1g(ml)能在溶剂 30~不到 100ml 中溶解(E) 5. 系指溶质 1g(ml)能在溶剂 10~不到 30ml 中溶解(D) 3. 检验方法与限度 检验方法: 按规定的方法进行检验,否则应做比较实验,仲裁以药典为准。 限度:包括上和下限两个数值本身及中间数值,最后一位为有效数值。原料药含量(%)一般为重 量比,上限未作规定时为 101.0%。 注意:如规定上限为 100%以上时,系指用本方法测定时可能达到的数值,并非真实含量,是本测定方法允 许的偏差。 例 中国药典规定盐酸苯海拉明的含量按干燥品计算,不得少于 99.0%,这一含量应是 A. 盐酸苯海拉明的真实含量 B. 盐酸苯海拉明的规定限度 C. 盐酸苯海拉明的含量 D. 盐酸苯海拉明干燥品的含量 E. 按苯海拉明计算的含量 4. 对照品、标准品 用于鉴别、 检查、 含量测定的标准物质, 由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、 标定和供应。 注意:对照品与标准品的区别 标准品 对照品 用于生物检定、 抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质, 按效价单位 (或 ?g) 计, 除另有规定外,均按干燥品(或无水物)进行计算后使用。 以国际标准品进行标定。 标准品、对照品均应附有使用说明书、标准质量要求(包括水分等) 、使用期限和装量等。 标准品系指 A. 用于生物检定的标准物质 B. 用于抗生素含量或效价测定的标准物质 C. 用于生化药品含量或效价测定的标准物质 D. 用于校正检定仪器性能的标准物质 E. 用于鉴别、杂质检查的标准物质 对照品系指 A. 自行制备、精制、标定后使用的标准物质 B. 由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应的标准物质 C.按效价单位(或 ?g)计 D. 均按干燥品(或无水物)进行计算后使用 E. 均应附有使用说明书、质量要求、使用有效期和装量等 5. 计量 试验用的计量仪器均应符合国家技术监督部门的规定。 本版药典采用的计量单位:滴定液和试液的浓度、温度、百分比、液体的滴、溶液后记示的“ (1 10) ”等符号、药筛分等、计算分子量所使用的原子量。 按药典规定,精密标定的滴定液(如盐酸及其浓度)正确表示为 A. B. 盐酸滴定液(0.152mol/L) 盐酸滴定液(0.1524mol/L)

C. D. E. 6. 精确度

盐酸滴定液(0.152M/L) 0.1524M/L 盐酸滴定液 0.152mol/L 盐酸滴定液

“称取”或“量取”精确度根据数值 的有效位数来确定: 0.1g 2g 2.0g 2.00g 称定: “约” : 量取: 0.06~0.14g 1.5~2.5g 1.95~2.05g 1.995~2.005g

精密称定:称取重量应准确至所取重量的千分之一 称取重量应准确至所取重量的百分之一 指取用量在规定量的〒10% 可用量筒,或按照量取体积的有效位数选用量具

精密量取:量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精密度要求 恒重: 连续两次重量差异<0.3mg(第二次称重需在干燥 1 h 或炽灼 0.5 h 后) 。 7. 试药、试液、指示剂 试验用水,除另有规定外,均系指纯化水。 酸碱度检查所用的水,均系指新沸并放冷至室温的水。 酸碱性试验时,如未指明用何种指示剂,均系指石蕊试纸。 (二)正文 是药典的主要内容,为所收载药品或制剂的质量标准。项下按顺序: (1)品名 (2)有机药物结构式 (3)分子式与分子量 (4)来源或有机药物化学名称 (5)含量或效价规定 (6)处方 (7)制法 (8) (9) 性状 鉴别

(10)检查 (11)含量或效价测定 (12)类别 (13)规格 (14)贮藏 (15)制剂

【性状】本品为白色有光泽的结晶性粉末;无臭、味微苦;饱和水溶液显酸性反应。 本品在乙醇或乙醚中溶解,在氯仿中略溶,在水中极微溶解;在氢氧化钠或碳酸钠溶液中溶解。熔点 本品的熔点(附录 VIC)为 174.5 ~ 178 ?C。 【鉴别】 (1)本品显丙二酰脲类的鉴别反应(附录 III) 。 (2)取本品约 10mg,加硫酸 2 滴与亚硝酸钠约 5mg(略) (3)取样品约 50mg,臵试管中(略) (4)本品的红外吸收光谱应与对照谱图(光谱集 227 图)一致。 【检查】 酸度 乙醇溶液的澄清度 中性或碱性物质 干燥失重(附录 VIII L) 炽灼残渣(附录 VIII N) 【含量测定】 取本品约 0.2g,精密称定,加甲醇 40ml 溶解,再加新制的 3%无水碳酸钠溶液 15ml,照 电位滴定法 (附录 VIIA) , 用硝酸银滴定液滴定。 每 1ml 硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 相当于 23.22mg 的 C12H12N2O3。 【类别】镇静催眠药、抗惊厥药 【贮藏】密封保存 【制剂】苯巴比妥片

(三)附录 正文中试验用的试药,括号中加注的附录为所用方法的依据,如前苯巴比妥。 附录部分主要收载制剂通则、通用检测方法和指导原则。 二部附录收载:制剂通则、药用辅料、一般鉴别试验、分光光度法、色谱法、物理常数测定法、一般 定量分析法、一般杂质检查方法、制剂检查法、生物检定法、生物测定法、放射性药品检定法、试药与滴 定液、制药用水、灭菌法、原子量表和指导原则。 附录中收载的指导原则, 为执行药典、 考察药品质量标准、 起草和复核药品标准所制定的指导性规定, 不作法定标准。 Ch.P(2010)二部附录收载的指导原则: ? ? ? ? ? ? ? ? ? 药品质量标准分析方法验证指导原则 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则 原料药与药物制剂稳定性试验指导原则 缓释、控释和迟释制剂指导原则 微囊、微球与脂质体制剂的指导原则 药品杂质分析指导原则 药物引湿性试验指导原则 近红外分光光度法指导原则 拉曼光谱法指导原则 中文索引(汉语拼音)英文索引

(四)索引 二、三部

二、主要国外药典 (一)美国药典 (二)英国药典 BP 是由英国药典委员会(British Pharma-copoeia Commission,BPC)编制出版。自 1816 年开始编 目前版本为 USP37-NF32

制《伦敦药典》 ,后出版有《爱丁堡药典》和《爱尔兰药典》 ,1864 年合并为《英国药典》 。BP 的最新版本 为 2014 年版,缩写为 BP(2014) ,自 2014 年 1 月 1 日起生效。 (三)欧洲药典 EP 由欧洲药品质量管理局(European Quality Control of Medicines,EDQM)编撰出版,有英文和 法文两种法定文本,为 27 个成员国及欧共体所认可。其最新版本为第 8 版,简写为 EP8.0,2014 年 1 月起 执行。 除人用和兽用疫苗、免疫制剂、放射性药物、天然药物等生物制品外, 《欧洲药典》不收载制剂,均为 原料药。 (四)日本药局方 JP 即《日本药局方》 ,由日本药局方编集委员会编制,厚生省颁布执行。最新版 2012 年版为第十 六版,即 JP(16) 。 ? 在正文“法定品种”标准中,依次列有:①药品名称(包括英文名、日文名) ;②结构式、分子式 与分子量;③化学名及 CA 登录号;④含量要求;⑤性状(Description) ,在制剂品种项下为制法; ⑥鉴别(Identification) ;⑦物理常数与检查;⑧含量测定(Assay)方法及其计算公式;⑨容器与 包装(Containers and Storage) 。 (五)国际药典 目前,Ph. Int.为第四版

Ph. Int.是由世界卫生组织(World Health Organization,WHO)国际药典和药物制剂专家咨询小组 编撰,由世界卫生大会批准出版,并被建议“由药典官方机构来考虑是否最终收载其中的条款” 。 除非被药典官方机构接受,国际药典不作为任何国家的法定药典。 三、药品质量控制 药品质量监督中, 依据质量标准对药品进行质量检验是确保药品质量的可靠手段, 但并非唯一的保 障体系。为保证临床用药的安全有效,对药品的各个环节进行全面的质量管理已成为各国药品质量监督管 理部门的共识。 1. 中国的法令性文件(5P) ? ? ? ? ? ? ? 《药物非临床研究质量管理规范》 (Good Laboratory Practice,GLP) 《药物临床试验质量管理规范》 (Good Clinical Practice,GCP) 《药品生产质量管理规范》 (Good Manufacture Practice,GMP) 《药品经营质量管理规范》 (Good Supply Practice,GSP) 《中药材生产质量管理规范》 (Good Agriculture Practice,GAP) 标准操作规程 (SOP) , 在药品的研究、 生产、 供应等各个环节的每项具体操作均应建立相应的 SOP。 质量控制(QC) ,在实施各项实验操作 SOP 的同时,实验操作过程的 QC 已成为实验室科学管理 的重要内容,也是实验室提供准确可靠数据的重要保证。 3. 人用药品注册技术要求国际协调会(ICH) 世界各国对药品的研发、生产、销售、进口等进行审批,其药品注册制度的技术要求各不相同,为 了避免国际间制药工业人力物力的浪费,由欧盟国家,美国、日本三方于 1990 年发起了《人用药品注册技术 要求国际协调会》(ICH)。 (一)ICH 组建目的 1. 三方成员国药品注册技术要求的协调 2. 新药研究开发技术标准的改进与革新 3. 节约人力物力、缩短研究开发周期,提高效率。 (二)ICH 的协调内容

2. 标准操作规程与质量控制

1.

协调的专题内容

(1)安全性(药理、毒理、药代) (2)质量(稳定性、验证、杂质、规格) (3)有效性(临床试验,GCP) (4)综合学科(术语、管理通讯) 2. ICH 职责 (1)创造注册部门与制药部门对话的场所 (2)监测和更新已协调文件 (3)随着新技术进展和新治疗方法,及时协调 (4)推动新方法替代现有方法 (5)鼓励已协调文件的交流和应用 我国的 GLP、 GCP 等各项新药研究的指导原则, 是根据我国国情并参照 WHO 和 ICH 的指导原则 制订的,使我国的新药研发逐步与国际接轨并达到国际水平。 第二节 药品检验工作的机构和基本程序 政府药品监督管理部门,根据法律赋予的职权和义务,依据药典、药品标准、药事管理法规和政 策,对国内药品研究开发、生产、销售、使用等进行监督管理。 二、药品质量监督管理的行政机构 1. 国家食品药品监督管理局 2. 省级食品药品监督管理局 3. 市、县级食品药品监督管理局 三、药品质量监督管理的技术机构 (一)国家药典委员会 负责组织编撰《中华人民共和国药 典》及制订、修订国家药品标准,是法定的国家药品标准工作 专业管理机构。 (二)各级药检所 《中华人民共和国药品管理法》第六条规定“药品监督管理部门设臵或确定的药品检验机构,承担 依法实施药品审批和药品质量监督检查所需的药品检验工作” 。 中国药品生物制品检定所:为国家级药品检验所 各省、市、自治区药品检验所:承担各辖区之内的药品检验工作 四、药品检验的基本程序 药品检验工作的基本程序: 药品检验工作的基本程序一般为取样、性状观察、样品制备、物理常数测定、鉴别、检查、含量测 定、检验报告。 (一)取样(Sampling) 应考虑到取样的科学性、真实性、代表性。 1. 2. 基本原则 特殊装臵 均匀、合理 如固体原料药用取样探针取样

一、药品质量监督管理的性质与意义

3. 取样量

设样品总件数为 x

当 x≤3 时,每件取样 当 x≤300 时,

按 x ? 1随机取样

当 x﹥300 时, 按

x 2 ? 1 随机取样

(二)性状观察(description) 性状项下一般记载有药品的外观、 色泽、臭、味、溶解度以及物理常数等。性状能综合反应药品 内在质量,在评价质量优劣方面具有重要意义。 (三)样品制备(sample preparation) 样品制备的发展趋势: 少用或不用有机溶剂,方法简单快速、尽量集采样、萃取、净化、浓缩、分离于一体。 (四)物理常数测定(physical constans) 对药品具有鉴别意义,也可反应药品的纯度,是评价药品质量的主要指标。 (五)鉴别(Identifcation) 鉴别是指用规定的试验方法来证明已知药物的真伪,采用一组(通常 2-4 个)项目全面鉴别。 (1)一般鉴别试验 依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征,通过化学反应来鉴别药物的真伪。只能证实是某 一类药物,而不能证实是哪一种药物。 (2)专属鉴别试验 依据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性,选用某些特有的灵敏的定性反应, 来鉴别药物的真伪。 鉴别方法: (1)化学鉴别方法 化学鉴别法操作简便、快速,实验成本低,应用广,有一定的专属性和灵敏度,但专属性比仪器 分析法差。 (2) 光谱鉴别法 a. 紫外光谱法 本法有一定专属性,应用范围广、使用频率高。同时,紫外-可见分光光度计的普及率高,操作也 比较简便,在药检工作中易于为大家接受。 b. 红外光谱鉴别法 药物的红外光谱能反映药物分子的结构特点, 具有专属性强的特点, 是验证已知药物的有效方法, 应用较广,主要用于组分单一、结构明确的原料药,亦可用于制剂的鉴别。 用本法鉴别药物时,中国药典要求按指定条件绘制供试品的红外光吸收图谱,与《药品红外光谱 集》中的相应标准图谱对比,如果峰位、峰形、相对强度都一致时,即为同一种药物。 (3) 色谱鉴别法 利用不同物质在不同色谱条件下,产生各自的特征色谱行为(Rf 值或保留时间)进行鉴别试验。 薄层色谱法(TLC) (4)生物学方法 是利用微生物或实验动物进行鉴别,主要用于抗生素和生化药物的鉴别。 (六)检查 包括药品的纯度要求、安全性、有效性、均一性等内容。 1. 有效性 药品的有效性,是以动物试验为基础,最终以临床疗效来评价的。 如对药物生物利用度有影响的因素的检查(粒度细度,晶型,平均分子量,含氟量)等。 2. 均一性 均一性主要是检查制剂的均匀程度,如含量均匀度、重量差异等。 3. 纯度要求 纯度要求即药物的杂质检查,亦称限度检查、纯度检查。 高效液相色谱法(HPLC) 气相色谱法(GC)纸色谱法(PC)

4. 安全性 用生物学方法检测药品中存在的某些痕量杂质, 如热原检查、 毒性试验、 刺激性试验、 过敏试验、 升压或降压物质检查等内容。 (七)含量测定 含量测定: 用理化方法测定有效物质,以质量单位为计算单位。 效价测定: 用生物学或生化方法测定生理活性物质,以效价单位(IU)为计算单位。

生物学方法包括生物检定法和微生物检定法。 生物检定法是利用药物对生物体或其离体器官组织所起的药理作用来检定药物效价的方法, 用于无 适当理化方法进行检定的药物. 抗生素微生物检定法是利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用, 采用量反应平行线原理的设计, 比 较标准品与供试品两种对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,以测定供试品效价的一种方法。 注意: 判断一个药物的质量是否符合要求,必须全面考虑鉴别、检查与含量测定三者的检验结果。 (八)检验报告 1. 检验记录 完整、真实、具体,清晰 (1)供试品情况(名称、批号、规格、数量、来源、外观、包装等) ; (2)日期(取样、检验、报告等) ; (3)检验情况(依据、项目、操作步骤、数据、计算结果、结论等) ; (4)若需涂改,只可划线,重写后要签名; (5)记录完成后,需复核。复核后的记录,属内容和计算错误的,由复核人负责;属检验操作错误的,由 检验人负责。 品名 批号 数量 取样数量 检验依据 检验记录 结论 复核人 2. 检验报告 (1)简洁明了、结论明确。除无操作步骤外其它内容同原始记录。 (2)检验人、复核人、负责人签名;必要时单位盖章 检验人 包装规格 厂牌来源 取样日期 报告日期

3. 结论 (1) 全面检验均符合质量标准 如:本品为“维生素 C”;符合中国药典(2010 年版)的规定。 (2)全面检验后有个别项目不符合规定 本品为“葡萄糖” ;检“乙醇溶液的澄清度”不符合规定,其他各项检验均符合中国药典( 2010 年版)的规定。认为可改作“口服葡萄糖”用,但不得供制备注射剂用。 (3)全面检验后不合药用者,或虽未全面检验、但主要项目不合规定,已可作不得供药用处理者。如: 本品为“葡萄糖注射液” ,其热原检查不符合中国药典(2010 年版)的规定,不得供药用。 (4) 根据送检者要求,仅作个别项目检验者。如: 本品(维生素 B12 注射液)的 pH 值为 5.5,检“pH 值”符合中国药典(2010 年版)的规定。 (pH 值 第三节 应为 4.0~6.0)

误差控制与数据处理

一、误差与误差控制 1. 误差(analytical error) 测量值(observation)与被测定药物的真实值(简称为真值)之间的的偏离(bias) 。 误差是测量值与真值之差,反映分析结果与真值的接近程度,是衡量一个分析方法的准确度 (accuracy)的指标。 ? ? ? ? ? ? 系统误差(systematic error) 、可定误差(determinate error) ,有固定的方向(正或负)和大小; 系统误差是由确定的因素引起的,可通过对分析系统进行校正加以消除; 系统误差分为方法误差、试剂误差、仪器误差及操作误差。 偶然误差(accidental error) 、不可定误差(indeterminate error) 、随机误差(random error) ,其产生 具有偶然性,其方向或大小均不固定。 由分析条件或环境条件的改变等偶然的因素引起,符合统计学规律:正负误差出现的概率大致相 等,往往能部分甚至完全抵消; 该类误差不能通过校正的方法加以消除,但可通过多次平行测定,以平均值作为分析结果来减小 该类误差; ? ? ? 绝对误差(absolute error) ,即误差,是指测量值与真值之差。因为测量值与真值的单位相同,所 以绝对误差的单位与测量值和真值的相同;绝对误差具有方向性,可以是正值,也可以是负值

δ=x-μ
相对误差(relative error)是指绝对误差与真值的比值,即误差率。因为绝对误差的单位与真值的 单位相同,所以相对误差没有单位。

2. 偏差 偏差(deviation,d)是指一组测量值中各测量值与该组测量值的平均值之差。它反映一组测量值 之间彼此符合的程度(或离散程度) ,是衡量分析方法的精密度(precision)的指标。偏差越大,精密度越 低。

d ? xi ? x

3. 误差的控制方法 选用合适的分析方法 减少测量过程的误差 验证并消除系统误差(回收试验、校准仪器、对照试验) 平行试验 二、不确定度 不确定度(measurement uncertainty) ,是表征合理地赋予被测量值的分散性,与测量结果相联系的 参数。如标准测量不确定度的标准偏差,或是说明了包含概率的区间半宽度。 ? ? ? ? ? 不确定度是以一个区间的形式表示。 如果是为一个分析过程和所规定样品类型做评估时,可适用于其所描述的所有测量值。 一般不能用不确定度数值来修正测量结果。 误差是被测量的单个结果和真值之差,是一个单个数值。 原则上已知误差的数值可以用来修正结果,但实际上误差是一个理想的概念,不可能被确切地知 道。 三、测量数据的统计处理 (一) 平均值的标准偏差 著下降。 在实际分析工作中,一般平行测定 2~3 次即可;而在进行方法学验证时,要求测定 5~6 次。 (二) 平均值的臵信区间 双侧臵信区间(一定臵信水平下,同时具有上下限的臵信范围) 单侧臵信区间 (三)可疑数据的取舍 在一组测量值中有时会出现个别过高或过低的测量值,称为可疑数据,在统计学上称为逸出值 (outliers,也称异常值或离群值) 。 对于可疑数据常采用以下做法: ① 重复相应部分的实验操作,以求得替代的数据; ② 用统计学方法评估可疑数据的来源,并决定取舍; ③ 舍弃可疑值,或在舍弃可疑值后以相邻数据替代。 四、有效数字的修约 有效数字: 在分析工作中实际能测量到的数字称为有效数字。 1. 在记录有效数字时,只允许末位欠准,而且只能上下差 1。 2. 单位改变时,有效数字的位数不变。

Sx ?

sx n

样本均值的标准偏差与测量次数的平方根成反比,但其可靠性提高的速度随测量次数的增加而显

3. 常量分析要达到千分之一的准确度,需保留四位有效数字。 4. 数字 0 在数字前面时,是定位用的无效数字,其余都是有效数字。 5. 首位为 8 或 9 的数,可多计一位有效数字。 6. pH、lgK 等对数数值,小数点后的位数为有效数字。 数字修约规则: 1. 四舍六入五成双。若 5 后还有数,宜进位。 2. 原测量值要一次修约至所需位数,不可分次修约。 (如:1.2349) 3. 运算中可多保留一位有效数字,算出结果后再按规定修约。 4. 修约标准偏差值或其他不确定度时,只要有效数字后面还有数字,都进位。 运算法则: 1. 加减运算可按小数点后位数最少的数保留。 2. 乘除运算可按有效数字位数最少的数保留。 第四节 药品质量标准分析方法验证 一、药品质量标准中分析方法验证 验证目的: 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求,方法验证理由、过程和结果均应记载在药品标准 起草或修订说明中。 需验证的分析项目: 1. 鉴别试验; 2. 杂质定量检查或限度检查; 3. 原料药或制剂中有效成分含量测定; 4. 制剂中其它成分(如防腐剂等)的测定; 5. 溶出度、释放度等检查中的溶出量等的测试方法。 验证内容: 验证内容有:准确度、精密度(重复性、 中间精密度和重现性) 、 专属性、检测限、定量限、 线性、范围和耐用性。 (一)精密度 1. 重复性 在相同条件下,由同一个分析人员测定所得结果的精密度。 在规定的范围内,至少用 9 个测定结果评价,例如,设计 3 个不同浓度,每个浓度分别制备 3 份 供试品溶液,进行测定。或将相当于 100%浓度水平的供试品溶液,用至少测定 6 次的结果进行评价。 2. 中间精密度 同一个实验室,不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。 考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。 3. 重现性 在不同实验室由不同分析人员测定结果之间的精密度。 法定标准采用的分析方法,应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性 结果,协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。 (二)准确度 指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,一般以回收率(%)表示。 精密度系指在规定的测试条件下,同一个均匀样品,经多次取样测定所得结果之间 的接近程度。一般以偏差(d) 、标准偏差 (SD)或相对标准偏差( RSD)表示。

回收率 ?
1. 原料药的回收率计算法

实测值 ?100% 实际值

取已知纯度的对照品或样品(加入量) ,按本法进行测定(实测值)
回收率 ? 实测值 ?100% 加入量

2. 制剂的回收率计算法 (1)取除被测物以外的各组分混合物,加入已知量的被测物,按本法进行测定。
回收率 ? 测定平均值? 空白值 加入量

(2)加样回收率试验 取已准确测得被测物的量(P)的制剂样品,加入已知量的被测物(A),按本法进行测定,得被测物的量 为 M。

回收率 ?

M?P ?100 % A

(3)还可以通过与已建立准确度的另一方法进行比较来确立本法的准确度。 中药制剂大多数采用加样回收率试验。 数据要求 定 3 次。 (三)专属性 指在样品介质中有其他成分(如杂质、降解产物、辅料)共存时,采用的方法对供试物准确而专 属的测定能力。 鉴别反应、杂质检查、含量测定方法,均应考察其专属性。如方法不够专属,应采用多个方法予 以补充。 (四)检测限(LOD) 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。 限度试验参数,无需定量测定。常用%、ppm、ppb 等表示。 1.非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物,试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。 2.信噪比法 把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较,算出能被可靠地检测出的最低浓 度或量。 一般以信噪比(S/N)3∶1 或 2∶1 时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。 3.标准偏差法 用空白样品进行分析,求得方法背景响应值的标准偏差 S 空,再将 3 倍空白标准偏差作为检测限 的估算值。 回收率试验中应注意至少用 9 次测定结果进行评价,一般制备 3 个不同浓度的样品,各测

LOD ? f ? 3S空 ?

C样 ? 3S空 A样

适用于不能直观比较信噪比的仪器分析方法(如紫外分光光度法) 。 (五)定量限 定量限系指样品中被测物能被定量检测的最低量,其测定结果应具一定的准确度与精密度。 常用信噪比法确定定量限,一般以信噪比为 10 : 1 时相应的浓度或注入仪器的量确定。 (六)线性 线性系指在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 数据要求:应列出回归方程、相关系数和线性图。 (七)范围 范围系指能达到一定的精密度、准确度和线性,测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 根据分析方法的具体应用、线性、准确度、精密度的结果和要求确定。 (八)耐用性

耐用性系指在测定条件有小的变动时,测定结果不受影响的承受程度。如果测定条件要求苛刻, 则应在方法中说明。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。 ? ? ? 典型的变动因素有:被测溶液的稳定性,样品提取次数、时间等。 HPLC 法中典型的变动因素有: 流动相的组成和 pH, 不同厂牌或不同批号的同类型色谱柱, 柱温, 流速等。 GC 法变动因素有:色谱柱、固定相,不同类型的担体,柱温,进样口和检测器温度等。

二、生物样品中药物定量分析方法验证 验证内容与药品质量标准分析方法基本相同,但方法与要求有所不同。 (一)分析方法的验证类型 1. 完全验证 完全验证(Full Validation)适用于首次建立和付诸实施的生物样品分析方法。 2. 部分验证 部分验证(Partial Validation)是对已通过验证的生物样品分析方法的修改部分进行验证,其验证 的范围应根据修改的内容确定。典型的分析方法的修改包括但不仅限于以下范围: (1) 同一个生物样品分析方法在实验室之间和分析人员之间的转移; (2) 获取生物样本时抗凝剂的改变; (3) 同种属内生物样品种类的改变(如:人血浆与人尿液) ; (4) 生物样品处理方法的改变; (5) 相同生物样品但种属的改变(如:大鼠血浆与小鼠血浆) ; (6) 有关浓度范围的改变; (7) 仪器系统和/或软件系统的改变; (8) 在特定的代谢产物存在下待测物选择性的证明。 3. 交叉验证 交叉验证 (Cross-Validation) 是指采用两种或两种以上方法用于相同研究或不同研究的测定数据时, 对验证参数进行的比较验证。例如:将一种已通过验证的原始分析方法作为参考,对修改后的分析方法进 行比较验证。 (二)分析方法的验证内容 专属性或选择性 基质效应; 精密度、准确度和提取回收率 标准曲线和灵敏度 生物样品中待测组分的稳定性考察 1. 专属性(特异性) (1)内源性物质的干扰 (2)药物代谢物的干扰 (3)在临床药物监测时要同时考虑服用药物的干扰 必须证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物, 内源性物质和相应的代谢物不得干扰样品 的测定。 对于色谱法至少要提供空白生物样品色谱图、空白生物样品外加对照物质色谱图(注明浓度)及 用药后的生物样品色谱图。 对于复方制剂应特别加强专属性研究,以排除可能的干扰。 2. 标准曲线与线性范围 标准曲线应包括一个空白样品(不加内标物的空白生物基质) 、一个零样品(空白生物基质中添加

内标物)和 6~8 个覆盖预期样品浓度的非零样品(包括 LLOQ) 。 3. 精密度与准确度 选择 3 个浓度的质控样品同时进行方法的精密度和准确度考察。每一个浓度至少测定 5 个样本。 低浓度:在定量下限的 3 倍以内 高浓度:接近标准曲线的上限 中间浓度 精密度: 用日内和日间标准差(RSD)表示,一般应小于 15%(在 LLOQ 附近小于 20%) 。 准确度:一般 应在 85~115%范围内(在 LLOQ 附近应在 80~120%) 。 4. 定量下限 测定 3~5 个半衰期后样品中药物浓度; 或峰值浓度的 1/20~1/10 的药物浓度; 准确度应在 80~120%范围内; RSD 应小于 20%; 信噪比应大于 5; 至少由 5 个标准样品测试结果证明 5. 样品稳定性 对含药生物样品在室温、冰冻和冻融条件下以及不同存放时间进行稳定性考察,确定生物样品的 存放时间和条件。 6. 提取回收率 又称绝对回收率。是反映提取或处理过程中待测药物的丢失情况,区别于方法回收率。 要求制备高、中、低 3 个浓度的样品,每一浓度至少 5 个样品。每个浓度的提取回收率应≥70%, 高中浓度的 RSD 应 ≤15%,低浓度的 RSD 应≤20%。 7. 基质效应 在 LC-MS 中, 色谱分离时共洗脱物质改变了待测成分的离子化效率, 所引起的信号的抑制或提高。 因样品来源不同,基质成分的不同,测定结果受到影响,有时会导致错误的判断,因此用 LC-MS 进行分析要对基质效应进行相关研究。 基质效应的消除: 1. 2. 3. 4. 制备样品时尽量除去基质 改善色谱条件,使待测成分与基质尽量分离 优化质谱分析条件 选择内标物

8. 质控样品 质控样品系将已知量的待测药物加入到生物介质中配制的样品,用于评价每一分析批中未知样品 分析结果的完整性和正确性。 9. 测定未知样品 应在生物样品分析方法确证完成之后开始测试未知样品。每个未知样品一般测定一次,必要时可进行 复测。每个分析批测定应建立新的标准曲线。 第 四 章 药物鉴别试验 药物的鉴别 (identification) 是根据 药物的化学结构和理化性质,用规定的试验方法来辨别药物真 伪的质量控制过程。

质量标准鉴别项下的试验方法用于证实是否为其标签所标示的药物。 鉴别试验的分类: 1. 按照鉴别方法的原理 物理学方法(熔点等物理常数的测定) 化学方法(颜色变化反应、沉淀生成反应等) 物理化学方法(分光光度法和色谱法等) 生物学方法 2. 按照鉴别方法的专属性 一般鉴别试验: 只能证实是某一类药物,而不能证实是哪 一种药物。 如:Na+ 、枸橼酸 、芳香第一胺类 等鉴别 专属鉴别试验: 如:维生素 B1 的硫色素反应 鉴别试验设计的依据: ? ? 鉴别试验是根据药物的化学结构、理化性质来进行设计的。 鉴别试验方法选用原则:

1. 有一定的专属性、灵敏度,并且易于推广 2. 尽量将化学法与仪器法相结合 3. 每种药品一般选用 2~4 种方法进行试验 鉴别试验的条件 : 1. 2. 3. 4. 5. 溶液的酸碱度 药物的浓度 溶液的温度与反应速度 共存物质的干扰 反应的溶剂

一、性状鉴别 质量标准“性状”项下的外观和溶解度,可作为药物鉴别试验的辅助试验,对药物的真伪进行初 步的判断。 一、外观性状 性状是对药品的色泽和外表感观的规定,一般包括药品的聚集状态、色泽、 臭、味等。 性状鉴别简便快速,但只用于初步判断。 二、溶解度 溶解度是指在一定温度下,物质在一定量的某种溶剂中达到饱和状态时所溶解的克数。 溶解度测定简便, 可供制备溶液使用, 对在特定溶剂中的溶解性能需作质量控制时, 应在 “检查” 项下另作规定。 二、物理常数测定法 药物的物理常数(physical constant)是药物的特性常数,收载于质量标准的性状项下。Ch. P 在附录中收载了相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、吸收系数、碘值、皂化值和酸值 等物理常数的测定方法。物理常数测定结果不仅对药品具有鉴别意义,也反映药品的纯度,是评价药品质 量的主要指标之一。 一、熔点 熔点是大多数固体有机药物重要的物理常数。测定熔点的药品,应是遇热晶型不转化,其初熔 点和终熔点容易分辨的药品。药物若纯度差,则熔点下降,熔距增长。因此通过测定药物的熔点,不但可

以鉴别药物真伪,也可用于检查药品的纯度。 测定方法: Ch. P 规定采用毛细管法测定熔点。 根据供试品性质的不同, Ch. P 附录收载了三种测定方法: 第一法用于测定易粉碎的固体药品;第二法用于测定不易粉碎的固体药品(如脂肪、脂肪酸、石蜡和羊毛 脂等) ;第三法用于测定凡士林及其他类似物质。 二、吸收系数 要物理常数。 测定方法: 1. 按照 Ch.P 附录分光光度法项下的仪器校正和检定方法进行校正; 2. 检查吸收池的配对性; 3. 取干燥的供试品适量,用规定的溶剂配制成吸光度在 0.6~0.8 之间的浓度(2 份) ,以配制供试品溶液 的同批溶剂为空白,在规定的波长处测定吸光度值,计算。 4. 精密吸取上述溶液适量,稀释 1 倍使其吸光度在 0.3~0.4 之间,以同批溶剂为空白,在规定的波长处 测定吸光度值,计算。 5. 高低浓度溶液均分别在 5 台不同型号分光仪上测定,计算得到的吸收系数同一台仪器 2 份间的偏差 不超过 1%,5 台仪器测得结果的相对标准差不能超过 1.5%。 6. 取平均值为药物的吸收系数。 三、比旋度 偏振光通过长 1 dm 且每 1 ml 中含旋光物质 1 g 的溶液, 在一定波长与温度下测得的旋光度称为比旋度。 比旋度是手性化合物重要的物理常数。可以用于鉴别手性药物的真伪,也可用于杂质检查和含量测定。 测定方法: 用旋光计测定。按各品种项下的规定进行操作。除另有规定外,供试液的测定温度应为 20℃〒0.5 ℃,使用波长 589.3 nm 的钠光谱的 D 线。将测定管用供试液体或固体药品的供试品溶液冲洗数 次,缓缓注入旋光计的样品管中,注意勿使光路中有气泡。臵于旋光计内检测读数。旋光度读数应重复 3 次,取其平均值。根据旋光度和溶液的浓度与液层厚度,计算比旋度。 三、化学鉴别法 化学鉴别试验(chemical identification)是指通过加入试剂与药物发生反应,观察反应现象,对药物进 行鉴别的试验。化学鉴别法为经典的鉴别试验方法,由于操作简便、快速,在质量标准中用得较多。 吸收系数(absorption coefficient) ,是指在一定波长下,单位光路长度,某物质单 位浓度的吸光度值。吸收系数与被测物质的结构、性质和测定波长等因素有关,是反映物质吸光性质的重

2.

氯化物

(1)取供试品溶液,加稀硝酸使成酸性后,滴加硝酸银试液,即生成白色凝乳状沉淀; 分离,沉淀加氨 试液即溶解,再加稀硝酸酸化后,沉淀复生成。 (2) 取供试品少量,臵试管中,加等量的二氧化锰,混匀,加硫酸湿润,缓缓加热,即发生氯气,能使用 水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。 3. 硫酸盐 (1)取供试品溶液,滴加氯化钡试液,即生成白色沉淀;分离,沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。 (2) 取供试品溶液, 滴加醋酸铅试液, 即生成白色沉淀; 分离, 沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。 (3)取供试品溶液,加盐酸,不生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别) 。

4. 钠盐 (1)取铂丝,用盐酸湿润后,蘸取供试品,在无色火焰中燃烧,火焰即显鲜黄色。 (2)取供试品约 100mg,臵 10ml 试管中,加水 2ml 溶解,加 15%碳酸钾溶液 2ml,加热至沸,应不得有沉 淀生成;加焦锑酸钾试液 4ml,加热至沸,臵冰水浴中冷却,必要时,用玻棒摩擦试管内壁,应有致密的 沉淀生成。 (二)常见有机结构的鉴别 1. 水杨酸类 2. 苯甲酸类 3. 芳香第一胺 4. 丙二酰脲类 5. 托烷生物碱类 二、专属鉴别试验 1. 颜色变化鉴别法 2. 沉淀生成鉴别法 3. 气体生成鉴别法 4. 荧光反应鉴别法 5. 衍生物熔点测定法 四、光谱鉴别法 一、紫外-可见分光光度法 紫外-可见吸收光谱与物质的结构有关, 同一物质在相同的条件下测得的吸收光谱应具有完全相 同的特征,故常用于药物的鉴别。光谱的形状、吸收峰数目、吸收峰(或谷)波长的位臵、吸光强度以及 吸收系数等均可作为鉴别的依据。 (一)常见方法 1. 核对吸收光谱的特征参数 布洛芬 Ch.P(2010) 【鉴别】 取本品,加 0.4%氢氧化钠溶液制成每 1ml 中含 0.25mg 的溶液,照紫外-可见分光光度法(附 录Ⅳ A) 测定, 在 265nm 与 273 nm 的波长处有最大吸收, 在 245nm 与 271nm 的波长处有最小吸收, 在 259nm 的波长处有一肩峰。 2. 比较规定波长处的吸光度比值 3. 比较供试品与对照品在一定波长范围内的吸收光谱 (二)特点 1. 操作简便、仪器普及,应用范围广 ,但要注意仪器的校正和检定。 2. 吸收光谱相同,不一定就是相同的物质 3. 溶剂的种类、溶液 pH 值及溶液浓度对鉴别试验结果可能会有影响 二、红外分光光度法 红外光谱是由物质分子的振动和转动能级跃迁所产生的光谱。几乎所有的有机化合物在红外光区 均有吸收,而且分子中不同官能团,在发生振动和转动能级跃迁时所需的能量各不相同,产生的吸收谱带 其波长(波数)位臵就成为药物鉴别的依据,其吸收强度则是定量分析的依据。 (一)鉴别方法 Ch.P 一般采用标准图谱对比法,即在规定的条件下测定供试品的图谱,再与 Ch. P 的配套用 书《药品红外光谱集》中记载的该品种的标准图谱对照,要求主要峰位、峰形和相对强度应一致。 USP 主要采用对照品对比法; BP 多采用对照品对比法,少部分采用对照图谱对比法; JP 一般采用对照图谱对比法

(二)特点 1. 专属性强、应用广泛。 2. 主要用于组成单一、结构明确的原料药的鉴别。制剂需提取分离排除干扰后再采用红外分光光度法鉴 别。 3. 还可用于药物晶型的鉴别。 4. 仪器分辨率的差异和不同的操作条件、药品晶型的差异、以及样品含水量的不同等多种因素都可能影 响红外光谱的测定结果。 五、色谱鉴别法 药物分子由于结构不同, 在固定相和流动相中的吸附或分配等性质不同, 所以在一定的色谱条件下 可产生差速迁移,根据药物分子的保留值等色谱参数 可对药物进行鉴别。 一、薄层色谱鉴别法 (一)鉴别方法 1. 对照品(或标准品)比较法 采用与供试品溶液同浓度的对照品溶液,在同一块薄层板上点样、展开与检视,供试品溶液所 显主斑点的颜色(或荧光)与位臵应与对照品溶液的主斑点一致,而且主斑点的大小与颜色的深浅也应大 致相同。 2. 选用与供试品化学结构相似的药物对照品与供试品溶液的主斑点比较,两者位臵应不同,或将上述两种 溶液等体积混合,应显示两个清晰分离的斑点。 (二)特点 1. 灵敏度高、专属性强、操作简便,在药物鉴别中应用广泛; 2. 由于薄层板的种类、展开剂的种类与比例、试验温度和湿度等多种因素均可影响色谱的分离效果, 故要注意实验条件的控制。 二、气相与高效液相色谱鉴别法 (一)测定方法 使用气相色谱仪或高效液相色谱仪测定。 一般采用对照品比较法, 规定按供试品含量测定项下 的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品(或标准品)色谱峰的保留时间(tR)应一致。含量测定方法 为内标法时, 可要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰的保留时间与内标峰保留时间的比值应相同。 (二)特点 1. 灵敏度高、专属性强、分析速度快 。 2. 操作时应按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验,使理论板数、分离度、重复性和拖尾 因子符合要求。 3. 气相色谱法适合于高温下稳定、容易气化药物的鉴别。 4. 高效液相色谱法不受药物气化和热稳定性的限制,适合于大多数药物的鉴别。 六、其他鉴别法 (一)显微鉴别 利用显微镜观察待检样品,描述显微特征,对其进行鉴别的方法。一般指对生药进行鉴别,观察 生药内部的细胞、组织构造及细胞内含物。 (二)生物学鉴别 药物通过一定的途径给予微生物、动物或离体器官,观察药理作用作为判断依据的鉴别。 七、晶型分析 (一)熔点测定 (二)热分析法 (三)X 射线粉末衍生法

(四)红外光谱法 第 五 章 药 物 的 杂 质 分析 第一节 杂质和杂质限量 一、药物的纯度要求 指药物纯净程度,反映了药物质量的优劣,含有杂质是影响药物纯度的主要因素。 药物中杂质指: 1. 2. 3. 有毒副作用的物质。 本身无毒副作用,但影响药物的稳定性和疗效的物质。 本身无毒副作用,也不影响药物的稳定性和疗效,但影响药物的科学管理的物质。 药物的纯度考虑杂质的生理作用,药物必须进行临床试验。药品只有两个等级:合格或不合格。 化学试剂有很多等级,如基准试剂、优级纯(GR) 、分析纯(AR) 、化学纯(CP) 、色谱纯、光谱纯。 二、杂质的来源与种类 (一) 杂质的来源 1. 生产过程中引入 (1)原料、反应中间体及副产物 (2)试剂、溶剂、催化剂类 (3)生产中所用金属器皿、装臵以及其他不耐酸、碱的金属工具所带来的杂质 2. 贮藏过程中引入 (1) 药物本身不稳定易水解氧化 易水解药物:酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等 易氧化药物:醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等 (2) 药物贮存不当 空气、湿度、温度、光照等因素使得药物变质: 如: 细菌污染、发霉、吸潮 AgNO3:光→Ag↓ (二)杂质的分类 1. 按结构分类 2. 按性质分类 3. 按来源分类 (1)一般杂质 多数药物在生产或贮藏中容易引入的杂质。如氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、 水分、易炭化物、炽灼残渣等。一般杂质其检查方法收载在中国药典的附录中。 (2)特殊杂质 指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质,如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中 的游离肼及甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药品的质量标准中。 三、杂质限量 杂质限量:药物允许杂质存在的最大量 杂质量 < 限量 < 杂质量 ↓ 符合规定 ↓ 不符合规定 无机杂质、有机杂质 信号杂质、有害杂质、无效或低效的异构体

药物的纯度与化学试剂的纯度:

杂质限量 ?

允许杂质存在的最大量 供试品量

根据杂质的本身性质与生产能力,参考各国药典标准制定。

百分之几 :无危害杂质(%) 百万分之几:危害人体健康的杂质,如砷盐、重金属等(ppm) 。 四、杂质限量检查方法 1. 对照法 取一定量被检杂质的对照品溶液与一定量的供试品溶液在相同条件下处理后,比较反应结果(比 色、比浊、比较色斑) ,确认杂质是否超过规定。 特点: 需要对照品 2. 灵敏度法 直接在供试品中加入试剂,在一定条件下反应,观察有无正反应出现。 特点:不需对照物质。 3. 比较法 供试品在一定条件下所测得数值与规定值进行比较,如控制一定波长下的 吸收度值来控制杂质限量。 特点:可准确测杂质含量,不需对照 五、杂质限量计算方法 不需知杂质的准确含量

第二节 1.

一般杂质及其检查方法 如纳氏比色管配对,刻度线高低相差不超过 2mm,砷盐检查时导气管长度及孔的

遵循平行操作原则

(1)仪器的配对性: 大小要一致等

(2)对照品与供试品的同步操作 2. 正确的比色、比浊方法 3. 检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份 一、氯化物检查法 (一) 原理: Cl-样 + Ag+ → AgCl↓白 Cl-标 + Ag+ → AgCl↓白 (二) 检查方法: 取各药品项下规定量的供试品,加水溶解使成 25ml(溶液若显碱性,可滴加硝酸使成中性) ,再加 稀硝酸 10ml;溶液如不澄清,应滤过,臵 50ml 纳氏比色管中,加水使成约 40ml,摇匀,即得供试品液。 另取各药品项下规定量的标准氯化钠溶液, 臵 50ml 纳氏比色管中, 加稀硝酸 10ml, 加水使成 40ml, 摇匀,即得对照溶液。 于供试溶液与对照溶液中,分别加入硝酸银试液 1.0ml,用水稀释至 50ml,摇匀,在暗处放臵 5 分钟,同臵于黑色背景上,从比色管上方向下观察,比较即得。 (三) 条件 1. 比色范围 标准氯化钠溶液:10ug/ml 的 Cl在测定条件下, 氯化物的浓度以 50ml 中含 50~80ug 的 Cl-为合适, 此范围内氯化物所显浑浊梯度明显,

便于比较;相当于标准氯化钠溶液 5~8ml。 2. 硝酸酸性 以 50mL 中含稀硝酸 10ml 为宜。 (1)避免弱酸银盐即氧化银的生成 (2)加速氯化银沉淀的生成并产生较好的乳浊 3. 试剂 5. 7. 硝酸银 4.供试液和对照液稀释后,再加硝酸银溶液,使生成白色浑浊而不是白色沉淀 避光、暗处放臵 5 分钟后比浊,避免光线使单质银析出 在黑色背景上,从上向下观察,比较浊度 平行原则 6. 比色方法

(四)干扰及排除 1. 溶液不澄清 以 HNO3 溶液洗净滤纸中的 Cl-,再以滤纸过滤供试品溶液。 2. 溶液有颜色 (1)外消色法 利用药物的化学性质外加试剂使溶液的颜色消除。 例:高锰酸钾中氯化物的检查 先加适量乙醇,使高锰酸钾还原褪色后依法检查。 (2)内消色法(倍量法) 取两份供试品溶液 1,2 供1 + AgNO3 摇匀 过滤 供3 比浊 供 3 + 氯化钠对照 对照供 2 3. 药物与硝酸银反应 4. 药物不溶于水 多采用加水振摇,使氯化物溶解,滤除不溶物再检查;或以乙醇、丙酮溶解后检查。 5. 有机氯杂质 二、硫酸盐检查法 (一) 原理: SO42-样 + Ba2+ → BaSO4↓白 SO42-标 + Ba2+ → BaSO4↓白 (二) 检查方法: 取各药品项下规定量的供试品,加水溶解使成约 40ml(溶液若显碱性可滴加盐酸使成中性;溶液 若不澄清,应滤过) ,臵 50ml 纳氏比色管中,加盐酸 2ml,摇匀,使得供试液。 另取药品项下规定量的标准硫酸钾溶液, 臵 50ml 纳氏比色管中, 加水使成约 40ml, 加稀盐酸 2ml, 摇匀,得对照溶液。 于供试液与对照液中, 分别加入 25%氯化钡溶液 5ml,用水稀释至 50ml,充分摇匀,放臵 10 分钟, 同臵黑色背景上,从比色管方向向下观察,比较。 (三)条件 1. 比色范围 标准硫酸钾溶液:0.1mg/ml 的 SO42在测定条件下,硫酸根的浓度以 50ml 中含 0.1~0.5mg 为合适,此范围内所显浑浊梯度明显,便于 比较;相当于标准硫酸钾溶液 1~5ml。 2. 盐酸酸性 以 50ml 中含稀盐酸 2ml,PH 值为 1 为宜

(1)避免碳酸钡与磷酸钡生成 (2)酸度影响硫酸钡的溶解度,从而影响灵敏度 3. 沉淀剂 25%的氯化钡溶液 稀释后加入沉淀剂,立即充分摇匀,保证生成为白色浑浊而非沉淀。 4. 比色方法 在黑色背景上,从上向下观察,比较浊度。 (四)干扰及排除 1. 溶液不澄清 以 HCl 溶液洗净滤纸中的 SO42-,再以滤纸过滤供试品溶液 2. 溶液有颜色 同氯化物 三、铁盐检查法 (一)硫氰酸盐法 1. 原理:铁盐在盐酸酸性中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子。 Fe3+ + 6SCN2. 检查方法: 除另有规定外,取各药品项下规定量的供试品,加水溶解使成 25ml,移臵 50ml 纳氏比色管中,加稀 盐酸 4ml 与过硫酸铵 50mg,用水稀释使成 35m1 后,加 30%硫氰酸铵溶液 3ml,再加水适量稀释成 50ml, 摇匀;如显色,立即与标准铁溶液一定量制成的对照溶液(取各药品项下规定量的标准铁溶液,臵 50ml 纳氏比色管中,加水使成 25ml,加稀盐酸 4ml 与过硫酸铵 50mg,用水稀释使成 35m1 后,加 30%硫氰酸铵 溶液 3ml,再加水适量稀释成 50ml,摇匀)比较,即得。 3. 条件: (1)比色范围 标准溶液: FeNH4(SO4)2 〃12H2O (10μgFe/ml)加硫酸防止水解。 在测定条件下, 50 ml 溶液中含有 10~50ug 的 Fe3+时显色梯度明显,相当于标准铁溶液 1~5ml。 (2)显色剂:过量硫氰酸铵 (3)盐酸酸性 防止水解,以 50mL 溶液中含 4ml 稀盐酸为宜。 (4) 比色方法 在白色背景上,从上向下观察,比较颜色。 (5)过硫酸铵 氧化 Fe2+为 Fe3+ 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 注意:某些药物在检查中已加硝酸处理,不需加过硫酸铵,但要加热去除氧化氮。 4. 干扰 (1)供试液若与对照液色调不一致,或生成物颜色浅不便比较时,可用正丁醇将生成物提取后比较。 (2)具环状结构的有机药物,需经 700~800℃炽灼破坏,使铁盐成三氧化二铁处理后再依法检查。 (3)干扰离子的影响 (二)巯基醋酸法(BP) 原理: 巯基醋酸还原 Fe3+为 Fe2+,并在氨碱性溶液中作用生成红色配位离子。 注意:加巯基醋酸前先加 20%的枸橼酸溶液 2ml
HCl

[Fe(SCN)6]3-

四、重金属检查法 重金属: 在实验条件下与 S2-可作用显色的金属杂质,以铅为代表 原理: Pb2+ + S2PbS ↓ 硫化氢试液 硫代乙酰胺试液 硫化钠试液 重金属检查法(Ch.P) :共三法 (一)第一法(硫代乙酰胺法) 取药品项下规定量的供试品,加醋酸盐缓冲液(PH3.5)2ml 与水适量使成 25ml,加硫代乙酰胺 试液 2ml,放臵 2 分钟后,与一定量标准铅同法制成的对照液比较。 检查重金属,除供试管、对照管外、还应有监控管同时进行比较。 监控管: 条件: 1. H2S PH3.5 +H2S + Pb --------PbS ↓ +2H
2+ +

供试品 + 标准铅

比较方法:供试管不得深于对照管,监控管应深于或等于对照管。

CH3CSNH2 +H2O ----- CH3CONH2 酸度大:硫化铅呈色变浅甚至不呈色 酸度小:不易生成硫化氢 2. 标准铅 硝酸铅:10ug/ml 的 Pb 3. 比色范围

27ml 中含 10~20ug 的 Pb,显色梯度最为明显;相当于标准铅 1~2ml。 干扰及排除: 1. 样品有色 (1)外消色法:对照液中加稀焦糖溶液调色 (2)内消色法: 供试液等分为两份;一份加硫代乙酰胺,过滤,加标准铅,为对照液 2. 微量高铁盐存在 在弱酸性溶液中可氧化硫化氢析出硫,产生浑浊影响比色。 可加抗坏血酸或盐酸羟胺,使高铁离子还原为亚铁离子。 3. 若供试品为铁盐 应先除去供试品本身的铁盐,再进行检查。 如:右旋糖苷铁注射液 在一定浓度盐酸中,用乙酸异丁酯提取除去铁盐,依法检查。 4. 供试品本身与硫离子反应通过加入掩蔽剂排除干扰。 (二)第二法(炽灼残渣法) 将供试品炽灼后检查或取炽灼残渣项下遗留的残渣进行检查的方法。 用于在水、乙醇中难溶,或能与重金属离子形成配位化合物的有机药物。 操作步骤: 1. 碳化 2. 硫酸处理 3. 高温灰化 温度越高,重金属损失越多,一般控制在 500~600?C 即可使完全灰化。 4. 炽灼残渣加硝酸加热处理使有机物进一步分解破坏完全

5. 蒸干除尽氧化氮防止亚硝酸氧化硫化氢析出硫 6. 加盐酸使样品成为氯化物 7. 水浴加热除去盐酸,加水溶解后以氨水调 PH 至对酚酞显中性,加醋酸盐缓冲液 8. 依一法检查 注意: 含钠盐或氟的有机物在炽灼时可腐蚀坩埚而引入重金属,应改用铂坩埚或硬质玻璃蒸发皿。 (三)第三法(硫化钠法) 主要用于易溶于碱性条件而难溶于稀酸的药物,如磺胺类、巴比妥类。 检查方法:取规定量的供试品,加氢氧化钠试液 5ml 与水 2ml 溶解后,加硫化钠试液 5 滴,再与标准铅溶 液同法处理后比较。 注意: 硫化钠试液对玻璃有一定的腐蚀性,且久臵后会产生絮状物,应临用前新配。 第一法适用范围: 在弱酸性水溶液实验条件下,供试液澄清、无色,对检查无干扰的药物。 第三法适用范围: 对于易溶于碱或经除干扰处理后溶液显碱性的,以第三法进行检查。 PH 第一法 显色剂 适用范围 注意:对照溶液要平行操作

3~3.5

硫代乙酰胺

溶于水、稀酸乙醇药物

第二法

3~3.5

硫代乙酰胺

不溶于水、稀酸的药物

第三法 五、砷盐检查法 (一)古蔡氏法 1.

NaOH

硫化钠

溶于碱的药物

原理:金属锌与酸作用生成新生态的氢,与药物中的微量砷盐生成具有挥发性的砷化氢,遇溴化汞试 HCl 5ml H2O 至 28ml KI 5ml SnCl2 5滴 放臵 10′ Zn 2g Pb(Ac)2 棉花 HgBr2 试纸 45′ 比色

纸,产生黄色至棕色的砷斑,与一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较,判断药物中砷盐的含量。 供试品 对照液 3. 条件: (1) 比色范围 0.002mgAs3+/33ml 标准溶液:As2O3(1μgAs/ml)药典规定用 2ml 制备标准砷斑。 (2) 盐酸酸性 HCl (5mlHCl/33ml) (3) 碘化钾与氯化亚锡作用 a. 还原 As5+为 As3+,加快反应速度; b. 碘化钾被氧化生成的 I2 又可被氯化亚锡还原为 I-,I-与反应中生成的 Zn2+能形成稳定的配位离子,有利 于生成砷化氢的反应不断进行; c. 氯化亚锡与锌作用,在锌表面形成锌锡齐,使氢气均匀而连续地发生; d. 可抑制微量 Sb 的干扰,在实验条件下,100 ?gSb 存在不干扰。 (4) 锌粒应无砷 (5) 醋酸铅棉花 样品中硫化物生成的硫化氢气体干扰显色,以醋酸铅棉花吸收消除干扰。

药典规定:醋酸铅棉花 60mg,装管高度为 60~80mm。 (6) 溴化汞试纸 溴化汞试纸生成砷斑的灵敏度较氯化汞高,但所生成的砷斑不够稳定,反应中应干燥避光,并在 反应后立即进行比较。 4. 干扰及排除 (1)供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐 干扰:生成硫化氢或二氧化硫 排除:加硝酸处理使成硫酸盐 (2)供试品为铁盐 干扰:消耗碘化钾、氯化亚锡等还原剂,影响测定条件,氧化砷化氢 排除:先加酸性氯化亚锡试液,将高铁离子还原为低价铁离子后再检查 (3)有机砷需进行有机破坏 氢氧化钙石灰法破坏 无水碳酸钠碱融破坏 硝酸镁乙醇溶液灼烧破坏 (4)供试品为含锑药物 干扰:锑还原为锑化氢,与溴化汞试纸反应生成锑斑 古蔡氏法适用于不含 Sb 或含 Sb 量小于 100?g 的供试品。 干扰的排除:改用白田道夫法 (三 )二乙基二硫代氨基甲酸银 — 原理: 砷化氢与 Ag(DDC)溶液作用,使 Ag(DDC)中的银还原为红色胶态银。直接比色或于 510nm 波长处 测定吸收度,进行比较。 锑化氢与 Ag(DDC)的反应灵敏度较低。 此方法中,含量 500ug 以下的锑不干扰测定。 三乙胺作用: 吸收反应产生的二乙基二硫代氨基甲酸。 特点: 呈色稳定性好,低度,无臭;但呈色灵敏度较吡啶(USP 用)略低。 (四 )次磷酸法(BP) 原理: 盐酸酸性条件下,次磷酸还原砷盐为棕色游离砷,对照法比较 特点: 适于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物的砷盐检查,但灵敏度较低。
方 法 试 剂 砷斑 胶态银 胶态砷 游离砷 结 果

Ag-DDC 法

古蔡氏法 Ag-DDC 法 白田道夫法 次磷酸法

Zn、HCl、KI、SnCl2、HgBr2 Zn、HCl、KI、SnCl2、Ag-DDC SnCl2 H3PO2

六、溶液颜色检查法 控制药物中有色杂质限量的方法。

(一)第一法

目视比色法 与标准比色液比较的方法是全波长范围的定性观察

方法:取各药品项下规定量的供试品,加水溶解并稀释至 10ml,另取规定色调色号的标准比色液 10ml,臵 纳氏比色管中, 两管同于白色背景自上向下透视或平视观察, 供试管呈现的颜色与对照管比较, 不得更深。 (二)第二法 特点: 1. 2. 3. 能够更准确地反应药物颜色的变化 在供试品与标准比色液色调不一致时适用 单波长范围定量 色差计法 通过色差计直接测定溶液的透射三刺激值,对其颜色进行定量表述和分析。当目视比色法较难判断供 试液和对照液时,可考虑采用此法。是全波长范围定量。 七、易炭化物检查法 检查药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。 方法:取各药品项下规定量的供试品, 比色液: (1) “溶液颜色检查”项下的标准比色液 (2)由比色用氯化钴液,比色用重铬酸钾液,比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液; (3)高锰酸钾液 八、溶液澄清度检查法 检查药物中的微量不溶性杂质,用作注射剂的原料药一般应作此项检查。 (一) 方法: 供试品溶液 规定级号的浊度标准液 (二) 判断 澄清:供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂,或未超过 0.5 号浊度标准液。 几乎澄清:供试品溶液的浊度介于 0.5 号 到 1 号浊度标准液之间。 注意:所用溶剂主要为水(0.45um 孔径滤膜过滤而得) ,及酸、碱、有机溶剂,如为有机酸的碱金属盐类 药物强调用“新沸过的冷水” (三) 浊度标准液的配制: 浊度标准贮备液: 1.00%硫酸肼溶液与 10%乌洛托品溶液等量混合(乌洛托品易水解产生甲醛与肼缩合成甲醛腙,不 溶于水形成白色浑浊) 浊度标准贮备液 ? 浊度标准原液? 浊度标准液(5 级) 九、炽灼残渣检查法 检查有机药物或挥发性无机药物中混入的非挥发性无机杂质(金属氧化物或无机盐类) 。 原理: 有机药物经炽灼炭化、H2SO4 湿润(低温加热除去) 、高温 700~800℃炽灼至完全灰化,有机物 质破坏分解为挥发物逸出,非挥发性无机杂质成硫酸盐,为炽灼残渣。 垂直于伞棚灯下 10001x 照度 水平方向观察 加入 5ml 硫酸中,振摇溶解后,静臵 15min,与一定标准比色液 管,同于白色背景前平视观察比较,不得更深。 分光光度法 方法:配制一定浓度的供试品溶液,在可见光区规定波长处测吸收度,不得超过一定值。

(三)第三法

恒重: 供试品连续两次炽灼或干燥后的重量差异在 0.3mg 以下。 炽灼至恒重的第二次称重应在继续炽灼 30min 后进行。 注意: (1)加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐,并帮助有机物炭化 (2)若残渣需留作重金属检查时,炽灼温度为 500~600℃。 (3)含氟的药物对瓷坩埚有腐蚀,应采用铂坩埚。 (4)供试品的取样量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。一般应使炽灼残渣量为 1~2mg,残渣限量为 0.1%~0.2%。 0.05%: 0.1%: 0.1%以上: 十、干燥失重测定法 干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量,主要是水分,也包括其它挥发性物质。 (一)常压恒温干燥法 方法:将供试品臵于相同条件下已干燥至恒重的扁形称瓶中,在烘箱内于规定温度下干燥至恒重,由减失 的重量和取样量即可计算供试品的干燥失重。 *适用于受热较稳定的药物 *干燥温度一般为 105℃ *平铺厚度<5mm,疏松物质厚度<10mm 恒重: 供试品连续两次炽灼或干燥后的重量差异在 0.3mg 以下。 第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥 1h 后进行。 (二)干燥剂干燥法 适用于受热易分解或挥发的药物。 方法:将供试品臵于干燥器中,利用干燥器内的干燥剂吸收水分,干燥至恒重。 常用干燥剂:硅胶、硫酸、五氧化二磷 (三)减压恒温干燥法 2.67kPa 以下。 减压恒温干燥法(减压恒温烘箱) 减压干燥剂干燥法(减压干燥器) 减压恒温干燥剂干燥法(减压干燥器臵恒温烘箱) 十一、水分测定法 1. 费休法 适用于熔点低,受热不稳定或水分难赶除的药物。 方法:利用在减压条件下干燥温度降低、干燥时间缩短的原理,供试品在减压干燥器中干燥。压力一般在 取样 2g 取样 1g 取样少于 1g

炽灼残渣 %? ?

残渣重 ? 100% 供试品重 残渣及坩埚重 ?空坩埚重 ? 100% 供试品重

I2 ? SO 2 ? H2O ? 2HI ? SO 3

吡啶和甲醇可使可逆反应往正反应方向进行完全。适合干燥失重法不适用时,如药物易分解,但 含的为结晶水。 方法: 取供试品适量,除另有规定外,加入无水甲醇 2~5ml,不断搅拌下,用费休氏试液滴定至终点。

另取无水甲醇 2~5ml,按同法进行空白试验。 2. 甲苯法 利用水与甲苯在 69.3 ℃ 共沸蒸出收集馏出液。常用于颜色较深药品的测定。 十二、残留溶剂测定法 检查药物在生产过程中使用的,但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。 在溶剂残留量的限度的要求中,按有机溶剂毒性程度分为三类。 药典中采用气相色谱法检查。 药品中常见残留溶剂 第一类(应避免使用)苯、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、1,1-二氯乙烯、1,1,1-三氯乙烷 第二类(应限制使用)甲醇、乙腈、吡啶、甲苯、二甲苯、二氯甲烷、三氯甲烷、环己烷、二氧六环、四 氢呋喃、乙二醇、正己烷等 第三类(GMP 或其他质量标准要求限制使用)乙醇、醋酸、丙酮、乙酸乙酯、乙醚、甲酸、正丁醇、正戊 烷、异丁醇、异丙醇等 药品中常见的残留溶剂(第一、第二、第三类溶剂)的残留限度应符合规定。对其他溶剂,应根 据生产工艺的特点,制定相应的限度,使其符合产品规范、药品生产质量管理规范(GMP)或其他基本的 质量要求。 1. 色谱条件 固定相:填充柱或毛细管柱 载气: 氮气 检测器: 氢火焰离子化检测器检测 2. 色谱系统适应性 (1)用待测物的色谱峰计算的理论塔板数应大于 1000(毛细管柱 5000) ; (2)用内标法测定时,内标物与待测物色谱峰的分离度应大于 1.5; (3)用内标法测定时,每个标准溶液(限量待测溶剂与内标液)进样 5 次,待测物与内标物峰面积之比的 相对标准偏差应不大于 5%;若用外标法测定,待测物峰面积的相对标准偏差应不大于 10%。 3. 测定方法 第一法:毛细管柱顶空进样等温法 本法适用于被检查的有机溶剂数量不多,并且极性差异小的情况。 顶空进样法: 将样品溶液密封在一个样品不充满的容器中,在一定的温度下加热一段时间,使气液两相达到平衡, 然后取气相部分进入 GC 分析,测定样品上方蒸汽中的组分在原样品中的含量。 适合分析样品含量低,组成复杂,易挥发或易分解而不能直接进样的样品。可免去样品的萃取、 浓集步骤,避免污染。 但要求待测物有足够的挥发性。 第二法 第三法 第三节 毛细管柱顶空进样程序升温法 溶液直接进样法 常见杂质检查方法 利用药物与杂质在化学性质上的差异进行检查。 阿司匹林中水杨酸的检查: 取本品 0.1g,加乙醇 1ml 溶解后,加冷水适量使成 50ml,立即加新配制的稀硫酸铁铵溶液 1ml, 摇匀,30s 内如显色,与对照液比较,不得更深。限量为 0.1%。 维生素 E 中游离生育酚的检查: 本法适用于被检查的有机溶剂数量较多,并且极性差异较大的情况

一、化学分析法

取本品 0.10g,加无水乙醇 5ml 溶解后,加二苯胺试液一滴,用硫酸铈液(0.01mol/L)滴定,消 耗硫酸铈不得超过 1.0ml。 二、物理分析法 利用药物与杂质在物理性质上的差异进行检查。 臭味及挥发性差异、颜色差异、溶解行为差异、旋光性质差异。 (一)臭味及挥发性的差异 麻醉乙醚中异臭的检查 取本品 10ml,臵瓷蒸发皿中,使自然挥发,挥散完毕后,不得有异臭。 (二)颜色的差异 盐酸阿扑吗啡中分解产物的检查 取本品 0.10g,加无水氧化物的乙醚 5ml,振摇后,乙醚液只许显极淡的红色。 (三)溶解行为的差异 如克罗米通中游离胺的检查: 取本品 5.0g,加乙醚 70ml 溶解后,用稀盐酸振摇提取 2 次,每次 10ml,合并提取液,用乙醚洗涤 2 次,每次 50ml,分取酸性提取液,臵水浴上蒸发至干,在 105 (四)旋光性质的差异 硫酸阿托品中莨菪碱的检查 取本品,按干燥品计算,加水制成每 1ml 中含 50mg 的溶液,依法测定(附录 Ⅵ E) ,旋光度不 得过 –0.40° 三、光谱分析法 (一)紫外分光光度法 肾上腺素中检查肾上腺素酮:取本品,加盐酸溶液制成每 1ml 中含 2.0mg 的溶液,于 310nm 波长处测定, 吸收度不得超过 0.05, (肾上腺素酮在 310nm 波长处的为 453,肾上腺素在该波长处无吸收) 。 (二)红外分光光度法 用于药物中无效或低效晶型的检查。利用药物与杂质有特征峰差异进行检查。如甲苯咪唑中 A 晶 型的检查、无味氯霉素混悬剂中 A 晶型的检查。 (三)原子吸收分光光度法 主要用于金属元素的检查,具有灵敏度高、选择性好等优点。 如维生素 C 中铁盐和铜盐的检查。 (四) 荧光分析法 利用物质的荧光特性来进行分析。方法灵敏度高,专属性强。 利血平中氧化产物的检查 供试品臵紫外灯(365nm)下检视,不得显明显的荧光。 四、色谱分析法 (一)TLC (1)杂质对照品法 (2)供试品溶液自身稀释对照法 (1) 杂质对照品法 供试品→供试品溶液 杂质对照品→对照品溶液 判断:供试品中所含杂质斑点不得超过相应的杂质对照斑点 优点:同一物质,同一 Rf 值比较,准确度高、直观性强; 缺点:需要杂质对照品。 干燥至恒重,遗留残渣不得过 2.5mg。

(2) 供试品溶液自身稀释对照法 供试品 → 供试品溶液 供试液稀释 → 对照溶液 判断:控制杂质斑点个数;供试品溶液所显杂质斑点不得深于对照溶液的主斑点 优点:以供试品的稀溶液作为对照液,不需要杂质对照品,简单、价廉,还可配成几种限量的对照溶液 缺点:不同物质,不同 Rf 值比较,准确度差、直观性差。 (3)杂质对照法与供试品自身稀释对照法并用 (二)HPLC (1)外标法测定供试品中某个杂质的量 供试品→供试品溶液 杂质对照品→对照品溶液进样,测定,计算杂质的含量 缺点:需要对照品;不易准确控制进样量 (2)内标法加校正因子测定法 方法: 内标物+杂质对照品→对照溶液,进样,测定,计算校正因子 。 (3)不加校正因子的主成分自身对照法 方法 :
校正因子(f) ? As Cs AR CR

含量( C x) ? CR ?

Ax AR

供试品+内标→供试品溶液,进样,测定杂质和内标峰面积或峰高,计算杂质含量。

含量( Cx ) ? f?

Ax As Cs

S ???? ?? 供 试 品 溶 液 一定量供试品溶液 ?? ?? 对 照 溶 液
分别进样,测定供试品溶液中各杂质峰面积及其总和,与对照溶液主成分峰面积比较,控制供试品
稀释

溶剂溶解

中杂质的量。 优点:不需杂质对照品,可同时控制各个杂质及其总量限度。 缺点:检测波长处,各杂质和药物的吸收强度可能有差异,准确度差 (4)加校正因子的主成分自身对照法 方法: 药物对照+杂质对照品→进样,测定,计算杂质相对于药物的校正因子 (建立方法时) 。 测定时不需用杂质对照品。 (5) 峰面积归一化法 取一定量供试品溶液进样,测定各杂质及药物的峰面积,计算各杂质峰面积及其总和占总峰面积 的百分率,不能超过限量。 注意:溶剂峰不应计算在总峰面积内。 优点: 不需杂质对照品,简便易行。 缺点: 检测波长处,各杂质和药物的吸收强度可能有差异,控制杂质峰面积百分率不一定就是杂质限量,准 确度差。 4. GC 用于药物中挥发性杂质的检查。如药物中有机溶剂残留量测定。检查方法同 HPLC。 五、热分析法 (一)热重分析法 应用热天平在程序控制温度的条件下测量物质的质量随温度变化,记录质量随温度变化的曲线。 一般用来检查原料和药品的湿度。 (二)差热分析

在程序控制温度下,测量试样与参比物之间的温度差与时间的关系。 一般用来鉴别待测物质的晶型或检查待测物的纯度。 (三)差示扫描量热法 在程序控制温度下,测量输给待测物与参比物的能量差与时间的关系。 第 六 章 第一节 含量测定: 运用化学、物理化学或生物学的方法测定药物中主要有效成分的含量。 含量测定(理化方法) 效价测定(生物检定或微生物检定) 含量测定方法的要求: 准确、简便,测定结果要有良好的重复性和重现性。 原料药:强调结果的精密度 制剂:偏重方法的选择性 含量测定结果表示方法: 原料药:百分含量(限度要求高) 制剂: 标示量的百分含量(限度要求较宽) 第 二 节 定量分析方法的分类与特点 常用含量测定方法 : 化学分析法 仪器分析法 生物学方法 酶化学方法 药物的含量测定 概述

一、重量分析法 重量分析法 挥发法 萃取法 沉淀法 (一)重量分析法的特点 重量法直接用分析天平进行称量而获得分析结果, 不需要对照品或基准物质进行比较。 结果准确、 重现;但操作繁琐费时,灵敏度低,对低含量组分测定误差大。

二、容量分析法 容量分析法 (滴定分析法) 酸碱滴定法 沉淀滴定法 配位滴定法 氧化还原滴定法 非水溶液滴定法 (一)容量分析法的特点 容量法用于常量组分测定。虽专属性不高,但由于其具有准确度较高(一般相对误差可达 0.2%以 下) 、精密度好、仪器设备简单、试验成本低及操作简便、快速等优点,广泛用于原料药的含量测定。是化 学原料药含量测定首选。

1.

滴定度(T) 每毫升标准滴定溶液所相当于被测物质的重量(mg) 。 aA + bB --------->cC + dD

b T ? M B ? m a ? (mg / ml ) a
硬脂酸镁的测定 取本品约 0.1g, 精密称定, 精密加硫酸滴定液(0.05mol/L) 50mL, 煮沸至油滴澄清, 继续加热 10mL, 加甲基橙指示液 1~2 滴, 用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。 每 1mL 硫酸滴定液 的 MgO。 2. 百分含量计算 (1)直接滴定法 空白校正: (0.05mol/L)相当于 2.016mg

含量 % ?

T ?V ? F ? 100 % W

F?

m实际 m标准

含量% ?

(V ? V空 ) ? T ? F ?100% W

(2)

剩余滴定法 先加入定量过量的标准溶液 A,使其与被测药物反应,待此反应进行完全后,再用另一标准溶液

B 来回滴反应中剩余的标准溶液 A。

含量 % ?
做空白实验:

VA FATA ? VB FBTB ?100 % W

含量% ? ?
3. 相当于标示量的百分含量计算

(V空 ? V ) ? T ? F W

含量% ?

T ?V ? F w ? ?100% W 标示量

含量% ?
(三)药物分析中常见的容量分析法 酸碱滴定法 非水溶液滴定法 碘量法和溴量法 亚硝酸钠滴定法 络合滴定法 费休氏滴定法 三、光谱分析 (一)紫外-可见分光光度法

T ?V ? F 1 ? ?100% V样 标示量

根据物质对波长为 200~760 nm 这一范围的光吸收特性建立起来的一种定性、 定量和结构分析的方法。 1. 原理 Lambert -Beer 定律: 物质对单色光吸收强弱与吸光物质浓度、液层厚度关系定律。

A
E: (1)摩尔吸收系数 (2)百分吸收系数 2. 吸收系数
1% 百分吸收系数: E1cm

=

ELC

C 以“g/100ml”为单位的吸收系数。
其物理意义为:当吸光物质溶液浓度为 1%(1g/100ml) ,液层厚度为 1cm 时的吸光度。 摩尔吸收系数: 3. 仪器的校正和检定 (1)定期全面检定 (2)测定前对波长进行校正 (3)吸光度准确度的检定

?

C 以“mol/L”为单位的吸收系数。

(4)杂散光的检查 4. 测定方法 (1)对溶剂的要求 (2)测定波长的确证 (3)供试品溶液浓度应使测得的吸光度在 0.3~0.7 之间。 (1) 吸收系数法 (2)对照法

C(g/ml) ? A X CX ? A R CR

E

1% 1cm

A ? L ? 100 AX AR

C X ? CR ?

(3)标准曲线法 (4)计算分光光度法 (5)比色法 5. 特点 UV—Vis 灵敏度高,操作简便、快速、仪器价格较低廉,因此应用广泛。但由于仪器和操作的 原因,误差较容量分析法大,原料药应尽量避免使用。

(2)对照法

CR ? 含 量% ?
(二)荧光分析法

AX ?n? V AR ? 100% W

物质受光照射时,在吸收某种波长光的同时又发射出比原来波长更长的光,激发光停止照射,光 线随之消失,这种光称为荧光。荧光为发射光。利用荧光的物理特性进行定性与定量测定的方法称为荧光 分析法。 当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件一定时,在较稀浓度范围内药物的荧光强度与溶液 中该物质的浓度成正比。 特点: (1)灵敏度高 (2)溶液浓度大会发生“自熄灭” ,适合低浓度溶液的分析 (3)干扰因素多,需做空白 (4)可用衍生化扩大其应用范围 四、色谱法 利用物质在流动相与固定相两相中分配系数差异而得以分离,并在检测中能检出其信号,从而达 到分离、分析的一类分析方法。 具有高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快及应用范围广等优点。 (一)高效液相色谱法 1. 对仪器的一般要求 HPLC

一般为反相色谱,即流动相极性大于固定相极性。 固定相:多为十八烷基硅烷健合硅胶(C18 柱)或辛烷基硅烷健合硅胶(C8 柱) ; 检测器:多为紫外检测器; 流动相:多为甲醇-水或乙腈-水。 《中国药典》正文下各品种项下规定的条件除固定相种类,流动相组分、检测器类型不得改变之 外,其他如色谱柱内径、长度、流动相流速、流动相组成比例、柱温、进样量等均可适当改变,以适应具 体的色谱系统并达到系统适用性试验的要求。 2. 系统适用性试验 指用规定的对照品对色谱系统进行试验,应符合要求。包括理论板数(n) 、分离度(R) 、重复 性和拖尾因子(T)等四个指标。 理论板数 n: 分离度 R: 拖尾因子 T: 重复性: 用对照溶液,连续进样 5 次,峰面积 RSD 应≤2.0%;或配制相当于 80%、100%、120%的对照液, 加入规定的内标,分别进样 3 次,计算平均校正因子,RSD 亦应≤2.0%。 3. 测定方法及计算 (1)面积归一化法 测量色谱图上的除溶剂峰之外的所有色谱峰的总面积,计算各色谱峰占总峰面积的百分率。 测定误差大,一般用于粗略考察杂质的含量。 (2)外标法 标准曲线法 外标一点法 各品种项下规定 大于 1.5 0.95~1.05

C X ? CR ?
R 为对照 X 为样品

AX AR

(3)加校正因子的内标法 S 为内标 R 为对照 X 为样品 HPLC (二)气相色谱法 用于样品本身具挥发性,含有杂质等干扰的品种,如维生素 E。 液相色谱中多用外标法测定含量;气相色谱中多用内标法。 对仪器的一般要求: 色谱柱:分为填充柱和毛细管柱 检测器:多为氢火焰离子化检测器 流动相:氮气、氦气和氢气 进样方式:顶空进样或溶液直接进样 第二节 样品的前处理方法 化学原料药分析样品的制备方法通 常可分为三大类: 直接溶解法 化学分解法

f ?

AS / CS AR / CR

CX ? f ?

AX AS / CS

主要用于抗生素、生化药品及含杂质干扰测定的化学药品。广泛用于药物制剂及多组分

抗生素的含量测定。在药典中收载率呈大幅度上升趋势。

有机破坏法 药典中收载的一些含卤素与金 属的有机药物,随其在分子结构中 结合状态的不同,分析前要经 过不同的前处理过程,方可测定。 有机卤素药物: 结构特点:C—X 卤原子的活泼性: 1. 卤原子与碳原子直接相连,卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系。 乙烯型卤和芳卤 烯丙型卤和苄卤 卤代烷型 2. 分子中所含卤原子的个数 分子中所含卤原子的个数越多,活泼性越强。 3. 卤素的种类 含金属有机药物: 含金属的有机药物: 金属原子不与碳原子直接相连,通常为有机酸及酚的金属配位化合物。 如:酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁。 有机金属药物: 金属原子直接与 碳原子以共价键相连,结合比较牢固。 如:卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利 一、直接溶解法 当药物结构中具有可检测官能团时,可直接使用适当溶剂溶解后采用合适的方法测定。 如某些药物 难溶于常规有机溶剂,可加热简单方法释放官能团。 葡萄糖酸钙 — 配位滴定法 取本品 0.5g,精密称定,加水 100ml,微温使溶解,加氢氧化钠试液 15ml 与钙紫红素指示 剂 0.1g,用乙二胺四乙醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液自紫色转变为纯蓝色。每 1ml 乙二胺四乙 醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)相当于 22.42mg 的 C12H22CaO14〃H2O。 富马酸亚铁 — 氧化还原滴定法 取本品约 0.3g,精密称定,加稀硫酸 15ml,加热溶解后,放冷,加新沸过的冷水 50ml 与邻二氮 菲指示液 2 滴,立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 硫酸铈 滴定液(0.1mol/L)相当于 16.99mg 的 C4H2FeO4。 葡萄糖酸锑钠的测定 取本品约 0.3g,精密称定,臵具塞锥形瓶中,加水 100ml、盐酸 15ml 与碘化钾试液 10ml,密塞、 振摇后,在暗处静臵 10min,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定,至近终点时,加淀粉指示液,继续滴定 至蓝色消失, 并将滴定的结果用空白试验校正。 每 lml 的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于 6.088mg 的 Sb。 二、化学分解法 药物结构中存在潜在的活性基团,可将药物结构部分分解后测定。 (一)水解法 1. 碱水解法 三氯叔丁醇的测定 Ch.P(2010) 取本品约 0.1g,精密称定,加乙醇 5mL 溶解后,加 20%氢氧化钠溶液 5mL,加热回流 15min,放 冷至室温, 加水 20mL 与硝酸 5mL, 精密加硝酸银滴定液 (0.1mol/L) 30mL, 再加邻苯二甲酸二丁酯 5mL, I>Br>Cl>F 不活泼 活泼 介于两者之间 含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者,而不 包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐。

密塞,强力振摇后,加 硫酸铁胺指示液 2mL,用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定,并将滴定的结果用空 白试验校正。每 1mL 硝酸银 滴定液(0.1mol/L)相当于 6.216mg 的 C4H7Cl3O〃1/2H2O。 2. 酸水解后测定法 醋氨苯砜的含量测定: 在酸性溶液中水解,芳酰胺基水解为芳伯氨基,亚硝酸钠滴定法测定含量 (二)碱性还原法 在碱性溶液中加还原剂(如锌粉) 回流,使卤素与碳结合键断裂,形成无 机卤后测定。 本法适用于测定结构中碘与苯环直接相连,且一个苯环上含多个碘原子的含卤素有机药物。 泛影酸的测定 Ch.P(2010) 取本品约 0.4g,精密称定,加氢氧化钠溶液 30mL 与锌粉 1.0g,加热回流 30min,放冷,冷凝管用 少量水洗涤,滤过,烧瓶与滤器用水洗涤 3 次,每次 15mL,洗液与滤液合并,加冰醋酸 5mL 与曙红钠指 示液 5 滴,用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每 1mL 硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 20.46mg 的 C11H9 I
3

N2O4。 Ch.P(2010)收载的胆影酸、碘番酸、胆影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法测定。

三、有机破坏法 含金属、卤素、氮、硫、磷等有机药物结构中的待测原子与碳原子结合牢固者,用水解或氧化还 原法也难以将待测原子转为无机形式,必须用有机破坏的方法将药物结构破坏完全,方能选用合适的分析 方法进行测定。 (一) 湿法破坏 — 酸消解法 本法主要使用硫酸作为分解剂(消解剂或消化剂),常加入氧化剂(如硝酸、高氯酸、过氧化氢等)作为辅 助分解剂。 1. 硝酸-高氯酸法 本法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏,有机金属药物经破坏后,得到的无机金属离子一般 呈高价态。本法不能用于含氮杂环药物的破坏。 2. 硝酸-硫酸法 本法适用于大多数有机物质的破坏,破坏得到的无机金属离子均为高价态。本法不能用于含碱土 金属有机药物的破坏。 3. 硫酸-硫酸盐法 本法是往样品中加入浓硫酸作氧化剂,加入硫酸盐提高硫酸的沸点,增强硫酸的氧化破坏能力, 且防止硫酸的分解损失。 本法常用于含砷或锑有机药物的破坏,破坏得到的无机金属离子多为低价态。 4. 其它湿法 硝酸—硫酸—高氯酸法; 硫酸—氧化剂法(过氧化氢法、高锰酸钾) 。破坏后,金属呈高价态。 5. 凯氏定氮法 — 氮测定法 应用于测定含有氨基或酰胺结构的药物含量。 原理: 有机含氮化合物与硫酸共热,药物分子中有机结构被氧化分解,有机结合的氮转变成氨,并与硫 酸结合成为硫酸氢铵及硫酸铵,用氢氧化钠碱化后,释放出氨气,随水蒸气馏出,用硼酸溶液或定量的酸 吸收后,用酸滴定液或碱滴定液滴定,并将滴定结果用空白试验校正。根据与氨作用的酸量计算供试品中 氮的含量或换算为被测药物的含量。 (二)干法破坏 1. 高温炽灼法 本法系将含待测元素的有机药物经高温灼烧灰化,使有机结构分解而待测元素转化为无机元素或 可溶性无机盐,以供分析。

2. 氧瓶燃烧分解后测定 氧瓶燃烧法: 本法是将分子中含有卤素或硫等元素的有机药物在充满氧气的密闭燃烧瓶中进行燃烧,并将燃烧产物 吸收于适当的吸收液中,再采用适宜的分析方法来检查或测定卤素或硫等元素的含量。 适用于含卤素、硫、氮、硒等有机药物的分析。 (2)燃烧分解操作 a. 燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后,按各药品项下的规定加入吸收液,并将瓶口用水湿润小心急速地通入氧气 1min, 立即用表面皿覆盖瓶口。 吸收液: 吸收液的作用是将样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素、硫、氮、硒等,定量地吸收并转变 为一定的便于测定的价态。 b. 样品的准备 取样品适量,精密称定后按规定方法包裹,固定于铂丝下端的网内或螺旋处。 固体样品:用剪裁成一定形状的无灰滤纸包裹 液体样品:装于用透明胶纸和无灰滤纸做成的纸袋 软膏类: 包裹在不含被测成分的蜡油纸中,再用无灰滤纸将蜡油纸包包裹在里边 点燃滤纸包尾部, 迅速放入燃烧瓶中, 按紧瓶塞, 加水少量封闭瓶口, 燃烧完毕 (应无黑色碎片) , 充分振摇,使生成的烟雾完全吸入吸收液,放臵 15min,用水少量冲洗瓶塞及铂丝,合并洗液及吸收液, 同法另做空白试验。按各药品项下规定的方法进行检查或测定。 (3)注意事项 ? ? ? ? 第七章 第一节 燃烧瓶要洗净,不得残留有机溶剂;应选择气密性好及与样品量相适宜的燃烧瓶。 燃烧完全应注意:氧气要充足;样品要干燥。 燃烧烟雾应完全吸收。 应同时做空白实验。 药物制剂分析 药物制剂分析及其特点 c. 样品的燃烧

一、药物制剂: 符合药用规格要求的原料药,按一定生产工艺制备而成的直接用于防病、治病的药物,称药物制剂,简称 制剂。 二、制剂分析: 是利用物理、化学或其他有关化学的方法,对不同剂型的药物制剂进行分析,以检验该制剂是否符合质量 标准规定的要求。药物制剂分析也主要包括鉴别、检查和含量测定三个方面。 三、制剂分析的特点 (与原料药分析比较) 1. 2. 鉴别:可以参考原料药的方法,但当辅料有干扰时,A.除干扰;B.改他法 检查:由于制剂是用符合规定的原辅料制备而成,故一般制剂分析时不需重复原料药的检查项目,而 如:阿司匹林及其制剂的鉴别 是检查制剂在制备过程中和贮藏过程中产生的杂质;并完成制剂(各剂型)相应的检查项目。 杂质检查 制剂制备过程中和贮藏过程中 如:阿司匹林片中应检查游离水杨酸(虽然原料已作 SA 的检查,但因 ASA 极易水解,故片剂中仍需检查

SA,但其限量要求不同: ASA 中 SA (L=0.1%); ASA 片中 SA (L=0.3%) ) 剂型检查 A. 常规检查项目 药典附录中对各种剂型均规定了“制剂通则”,各种制剂均应符合其要求。 B. 特殊检查项目 如“含量均匀度检查”和“溶出度测定” 目的:保证药物的均一性、有效性和稳定性。 片剂 注射剂 胶囊剂 3. 重量差异、崩解时限 装量、装量差异、可见异物、不溶性微粒、无菌、细菌内毒素或 装量差异、崩解时限 热源

含量测定

1)干扰组分多(要求方法的专属性强) 2)主药含量低(要求方法的灵敏度高) 3)含量的表示方法及限度要求不同 制剂:强调方法的专属性和灵敏度 原料:强调方法的准确度和精密度 标示量(也称为规格) 制剂分析的特点: 1. 2. 3. 1. 2. 第二节 一、片剂分析 片剂系指药物与适宜的辅料均匀混合,通过制剂技术压制而成的圆片状或异形片状的固体制剂。 1.剂型检查项目 外观、硬度和耐磨性 重量差异 崩解时限 (2)重量差异定义:按规定称量方法测得片剂每片重量与平均片重之间的差异程度。 重量差异能够在一定程度上反映片剂中药物含量的均匀度,保证用药剂量的准确,是片剂均匀性的快速、 简便的检查方法。 平均片重或标示片重 <0.30g/片 ≥ 0.30g/片 (3)崩解时限 素片 糖衣片 薄膜衣片 肠溶衣片 ≤15′ ≤60′ ≤30′(盐酸液中崩解) =120′(盐酸液中完整) ≤60′(缓冲液中崩解) 重量差异限度 〒7.5% 〒5%

实际量 标示量%= ?100 % 标示量

鉴别项目较少,杂质限量控制及含量限度要求较宽,增加了“剂型检查” 。 成分复杂,要求方法的专属性强。 主药含量低,要求方法的灵敏度高。 辅料的干扰 有效成分之间的干扰

复方制剂分析的特点——更复杂:

药物剂型分析

20 片中超出限度的片≤2 片,且不得有 1 片超出限度 1 倍。

泡腾片 (4)含量均匀度 (5)溶出度的测定 (5)释放度测定 2. 片剂的含量测定

≤5′ (15~25℃) 凡检查含量均匀度的制剂,一般不再检查重(装)量差异。 凡检查溶出度的制剂,不再进行崩解时限的检查。 凡规定检查释放度的制剂,不再进行崩解时限的检查

(1)辅料对测定的干扰及排除 1)糖类 葡萄糖、乳糖:还原性 排除: A. B. 选氧化势稍低的滴定剂 过滤 如硫酸亚铁原料用 KMnO4 法,片剂用铈量法 Ch.P.(2010)维生素 C 片 干扰 氧化还原滴定

2)硬脂酸镁除 A. 干扰配位滴定:可加掩蔽剂(酒石酸) ; B. 干扰非水碱量法:因为硬脂酸镁亦消耗 HClO4。 排除方法: A)提取分离法 B) 加掩蔽剂(如草酸、酒石酸) C) 改用其他方法 3)滑石粉等 滑石粉、硫酸钙、淀粉等,不溶于水,也不溶于有机溶剂,使溶液混浊。 干扰:UV 法、旋光法 排除: (A)滤除法; (B)提取分离法:有机溶剂提取主药后,依法测定 (2)含量测定结果的计算 取样:一般取 10 片或 20 片,精密称定其总重量,求得平均片重,研细,精密称取检验量,按规定方法检 验。

取样量?Ws ? ?

规定量 ? 平均片重 标示量

m ?W 标示量% ? Ms ?100% 标示量
片剂 1) 2) 1.容量法:直接滴定 剩余滴定

标% ?

VTF ? 均片重 ? 100% M S ? 标示量

标% ?

( V0 ? V )TF ? 均片重 ? 100% M S ? 标示量

二、胶囊剂分析 (一)常规检查 1. 外观 胶囊剂应整洁、不得有黏结、变形、渗漏或囊壳破裂现象,应无异味。 2. 装量差异 (1)取胶囊 20 粒,分别精密称定重量; (2)倾出内容物,除净内容物,分别精密称定囊壳重量; (3)求每粒内容物的装量与平均装量。 平均装量 <0.30g/粒 ≥ 0.30g/粒 (二)胶囊剂的含量测定 装量差异限度 〒10% 〒7.5%

20 粒中超出限度的片≤2 粒,且不得有 1 粒超出限度 1 倍。

标示量% ?
三、注射剂分析

测得量 平均装量 ? ?100% 取样量 标示量

注射剂系指药物与适宜的溶剂或分散介质制成的供注入体内的溶液、乳状液或混悬液及供临用前配制或 稀释成溶液或混悬液的粉末或浓溶液的无菌制剂。 分类: 注射液 注射用无菌粉末 注射用浓溶液 (一)注射剂的检查 1. 注射液及注射用浓溶液的装量 以干燥注射器及注射针头抽净,注入经标化的量入式量筒内,室温下检视 规定:每支注射液的装量不得少于标示量。 装量: 2. ≤2.0ml 2.0ml~50.0ml 注射用无菌粉末的装量差异 5支 3支

方法:取供试品 5 瓶,分别称其装量,求其平均装量,并与每支装量进行比较,应符合规定。如有一支不 符合规定,另取 10 支复试。凡规定检查含量均匀度的注射用无菌粉末,一般不再进行装量差异检查。 3. 渗透压摩尔浓度 在溶质的扩散或通过生物膜的液体运转等各种生物过程中, 渗透压发挥着重要作用, 在制备注射剂、

眼用液体制剂的药物制剂时,必须关注其渗透压。 测定方法:冰点下降法 4. 可见异物 指存在于注射液、眼用液体制剂中,在规定条件下目视可以观测到的不溶性物质,其粒径或长度通常大 于 50?m。 检查方法: (1)灯检法 (2)光散射法 5. 不溶性微粒 在可见异物检查符合规定后,用本法检查静脉用注射剂中及供静脉注射用无菌原料药中不溶性微粒 的大小及数量。 检查方法: (1)光阻法 (2)显微计数法 6. 无菌 若供试品符合无菌检查法的规定,表明供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 检查方法: (1)直接接种法 (2)薄膜过滤法 7. 热原或细菌内毒素 方法:家兔法 《中国药典》规定,供静脉滴注用的注射剂以及容易感染热原的品种,都需检查热原 2)细菌内毒素 方法:鲎试剂法 (二)注射剂的含量测定 1. 辅料的干扰及排除 (1) 抗氧剂 常用的抗氧剂有亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠以及维生素 C 等,干扰氧化还 原滴定法或紫外分光光度法。排除干扰的方法: A. 加入掩蔽剂法 加丙酮或甲醛,其羰基可与亚硫酸氢钠加成反应。 注意:甲醛有一定的还原性 B. 酸分解法 加酸、加热使抗氧剂分解 C. 加弱氧化剂氧化法 常见弱氧化剂:H2O2、HNO3 (2)溶剂油的干扰及排除 A. 有机溶剂稀释法 适用于含量高取样量少的注射剂,直接稀释即可使油的干扰减至最小。 B. 有机溶剂提取法 选择适当的溶剂,将药物提出后再进行测定。 C. 柱色谱分离法 1)热原

四、软膏剂、乳膏剂和糊剂的分析 软膏剂:药物与油脂性或水溶性基质混合制成的均匀半固体外用制剂。 乳膏剂:药物溶解或分散于乳状液型基质中形成的均匀半固体外用制剂。 糊剂:大量的固体粉末均匀分散在适宜基质中组成的半固体外用制剂。 (一)常规检查 粒度检查 最低装量

无菌 微生物限度 (二)含量测定 1. 基质干扰的排除 (1)液化基质后测定 (2)溶解基质后测定 (3)滤除基质后测定 (4)提取分离后测定 2. 含量测定计算

标示量% ?

测得量 1 ? ?100% 供试品量 标示量

例 5. 中国药典规定维生素 B12 注射液规格为 0.1mg/m1,含量测定如下:精密量取本品 7.5m1,臵 25ml 量瓶 中,加蒸馏水稀释至刻度,混匀,臵 lcm 石英池中,以蒸馏水为空白,在 361〒1nm 波长处吸光度为 0.593, 按为 207 计算维生素 B12 按标示量计算的百分含量为多少?

例 6. 用异烟肼比色法测定复方己酸孕酮注射液的含量。当己酸孕酮对照品的浓度为 50?g/ml,按中国药典 规定显色后在 380nm 波长处测得吸光度为 0.160。取标示量为 250mg/ml(己酸孕酮)的供试品 2ml 配成 100ml 溶液, 再稀释 100 倍后, 按对照品显色法同样显色, 测得吸光度为 0.154。 求供试品中己酸孕酮的标示量%。

AX ?D AR 标示量% ? ?100% 标示量 0.154 100 50? ? ?100 0.160 2 ? ?100% 250?103 ? 96.2% cR ?
例 7. 维生素 C 注射液(规格 2ml∶0.1g)的含量测定:精密量取本品 2ml,加水 15ml 与丙酮 2ml,摇匀, 放臵 5 分钟,加稀醋酸 4ml 与淀粉指示液 1ml,用碘滴定液(0.05011mol/L)滴定,至溶液显兰色并持续 30 秒钟不褪,消耗 10.56ml。每 1ml 碘滴定液(0.05mol/L)相当于 8.806mg 的 C6H8O6。计算维生素 C 注射液 的标示量%。

TVF VS 标示量% ? ?100% 标示量 0.05011 8.806?10.56? 0.05 2 ? ?100% 0.1 3 ?10 2 ? 93.2%
例 8. 盐酸去氧肾上腺素注射液 (1ml ∶ 10mg) 的含量测定: 精密量取本品 5ml , 臵碘瓶中, 加稀盐酸 1ml , 小心煮沸至近干,放冷,加水 20ml,精密加溴滴定液(0.05mol/L)25ml,再加盐酸 2ml ,立即密塞,摇匀, 放臵 15 分钟并时时振摇,注意微开瓶塞,加碘化钾试液 7ml,立即密塞,振摇后,用硫代硫酸钠滴定液 (0.1012mol/L)滴定,至近终点时,加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消失,消耗硫代硫酸钠滴定液 (0.1012mol/L) 20.48ml, 空白消耗硫代硫酸钠滴定液 (0.1012mol/L) 35.46ml 。 每 1ml 溴滴定液 (0.05mol/L) 相当于 3.395mg 的 C9H13NO2〃HCl。计算本品的标示量%。

T?V0 ? V ?F VS 标示量 %? ?100% 标示量 3.395? ?35.46 ? 20.48?? ? ? 102.9%
第二章 第一节 含氮类药物的分析 芳胺类药物的分析

0.1012 0.1 ?100%

5 10

一、结构与性质 1. 基本结构与代表药物 对氨基苯甲酸酯的基本结构
H2N COOCH2CH3 苯佐卡因

2. 主要性质: (1)芳伯氨基的特性 ①重氮化-偶合反应 ②与芳醛缩合为 Schiff 碱 ③易氧化变色 注: 盐酸丁卡因无此性质 酯键容易水解,光、热或碱有促进作用,可利用水解产物进行鉴别 (3)弱碱性(脂烃胺侧链) 与生物碱沉淀试剂生成沉淀非水溶液滴定法测定含量 (4)光谱特性 (5)有机碱的溶解特性 (2)水解特性

游离碱——油状液体或低熔点固体,难溶于水,易溶于有机溶剂 其盐酸盐——白色结晶性粉末,易溶于水和乙醇,难溶于有机溶剂

①直接反应 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、对氨基水杨酸钠 ②酸水解后起反应 贝诺酯 ③盐酸丁卡因无芳伯氨基,在酸性下与亚硝酸钠不起重氮化反应,但反应生成 N-亚硝基化合物,呈乳白色 沉淀。 盐酸普鲁卡因 [鉴别] Ch.P.(2010) (1)本品显芳香第一胺类的鉴别反应(附录Ⅲ) 取供试品约 50mg,加稀盐酸 1m1,必要时缓缓煮沸使溶解,放冷,加 0.1mo1/L 亚硝酸钠溶液数 滴,滴加碱性 β-萘酚试液数滴,视供试品不同,生成由橙黄到猩红色沉淀。 2. 水解产物的反应 酯键+水→酸+醇 例子: (1)盐酸普鲁卡因 (2)苯佐卡因 例 盐酸普鲁卡因 Ch.P.(2010) 【鉴别】 (1)取本品约 0.1g,加水 2ml 溶解后,加 10%氢氧化钠溶液 1ml,即生成白色沉淀;加热, 变为油状物;继续加热,产生的蒸气能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色;热至油状物消失后,放冷,加盐 酸酸化,即析出白色沉淀。 (2)苯佐卡因(碘仿反应) 例 苯佐卡因 Ch.P.(2010) 【鉴别】 (2)取本品约 0.1g,加氢氧化钠试液 5ml,煮沸,即有乙醇生成;加碘试液,加热,即生成 黄色沉淀,并发生碘仿的臭气。 3. 制备衍生物测熔点 Ch.P(2010)盐酸丁卡因 【鉴别】 (1)取本品约 0.1g,加 5%醋酸钠溶液 10ml 溶解后,加 25%硫氰酸铵溶液 1ml,即析出白色结晶; 滤过,结晶用水洗涤,在 80℃干燥,依法测定(附录ⅥC) ,熔点约为 131℃。 三、特殊杂质检查 1. 盐酸普鲁卡因及其制剂中对氨基苯甲酸的检查 杂质来源: HPLC 法 制备或贮藏过程中水解 对氨基苯甲酸---脱羧---苯胺 (有色、毒性增加)

2. 盐酸丁卡因及其制剂中有关物质的检查 TLC 法用于杂质的检查 1.杂质对照品法 2.供试品溶液的自身稀释对照法 3.杂质对照法与供试品自身稀释对照法并用(两法并用) 4.母体药物对照法(对照药物法) 当杂质斑点颜色与主斑点颜色有差异时应用,要求对照药物合格且稳定性好 P96 四、含量测定 1. 亚硝酸钠滴定法 适用范围: 具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物 (1)原理 Ar—NH2 ————>Ar—N ≡N+Cl(2) 测定条件 1)加入适量的溴化钾 第一步是控制步骤 Ar-NH2 浓度↑, NOCl ↑, 反应加快 成盐反应慢 Ar-NH2+HCl → Ar-NH2〃HCl 溴化钾起催化剂的作用

NH2 NOCl -HCl

NH-NO 互 变 异构

N=N-OH HCl -H2O

(重氮盐)

2)酸的种类及浓度 一般采用盐酸酸性,反应 mol 比 1:2,但实际用过量为 1:2.5~6 反应速度随酸种类的不同而不同: νHBr > ? ? ? ? ? 3)温度 在室温下(10℃~30℃)进行滴定 4)滴定方式与速度控制 过快 过慢 : : 指示剂变色,终点提前 HNO2 的分解逸失 νHCl > νH2SO4 ,HNO3 盐酸为何要过量? 加快重氮化反应速度 重氮盐在酸性溶液中稳定 防止生成偶氮氨基化合物 阻碍芳伯氨基的游离 亚硝酸易分解

酸度不宜过大

为了避免滴定过程中 HNO2 的分解逸失,滴定速度先快后慢。 滴定方式: 滴定管尖端插入液面下 2/3 处,在搅拌下一次性放下大部分滴定液,近终点前才提出滴定管,冲洗管尖, 再缓缓滴定至终点。 (3)指示终点的方法

永停滴定法(Ch.P.) 外指示剂法(KI-淀粉) 电位法 内指示剂法(中性红) 2. 酸碱滴定法

指针突然偏转,并不再回复 2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O 中性红 不可逆指示剂

盐酸丁卡因的水溶液显酸性,在反应体系中加入适量乙醇和盐酸,用氢氧化钠滴定液滴定,电位法指示滴 定终点。 盐酸丁卡因的含量测定: 取本品约 0.25g, 精密称定, 加乙醇 50ml 振摇使溶解, 加 0.01mol/L 盐酸溶液 5ml, 摇匀,照电位滴定法,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定,两个突跃点体积的差作为滴定体积。每 1ml 氢 氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于 30.08mg 的 C15H24N2O2 〃HC1。 3. 非水碱量法 盐酸丁卡因结构中脂烃胺侧链有弱碱性,可用非水碱量法测定 注意: 溶剂、试剂、滴定剂、终点指示

第二节

苯乙胺类药物的分析

一、结构与性质
HO CH CH2NH CH3 OH 肾上腺素

1.基本结构与代表药物 2. 主要性质: (1)弱碱性

HO

有烃胺基侧链,具有弱碱性 (2)酚羟基特性: ①与三氯化铁呈色 ②易被氧化呈色 ③易被溴取代(溴量法) (3)旋光性:手性碳原子 (4)芳伯氨基特性: (盐酸克仑特罗) (5)光谱特性 (6)溶解性:游离碱溶于有机溶剂而其盐溶于水 二、鉴别试验 1. 与 FeCl3 反应 2. 氧化反应 含酚羟基(特别邻二酚羟基) ,易被碘、过氧化氢和铁氰化钾等氧化呈色 3. 与亚硝基铁氰化钠(Rimini)反应 条件:脂肪族伯胺 4. 双缩脲反应 芳环侧链具有氨基醇结构 6. TLC 与 HPLC TLC 法规定主斑点的位臵和颜色应一致。 HPLC 法规定保留时间应一致。 + 亚硝基铁氰化钠 △无醛丙酮,NaHCO3 显 红紫色 此为脂肪族伯胺专属反应,如重酒石酸间羟胺,可与含脂肪仲氨基的肾上腺素区别。 紫色或紫红色

三、特殊杂质检查 1. 酮体的检查 来源:原料剩余,即氢化不完全

杂质限量检查法 1. 2. 3. 对照法 灵敏度法 比较法 Ch.P(2010) 取本品 0.50g,加温热至约 45℃的碳酸钠试液 10ml 溶解后,溶液应澄清。 P92

阿司匹林 例

【检查】溶液的澄清度

中国药典(2010 年版)规定肾上腺素中检查肾上腺素酮的方法为:取本品,加盐酸溶液(9→2000)制

成每 1ml 中含 2.0mg 的溶液,于 310nm 波长处测定,吸收度不得超过 0.05,已知肾上腺素酮在 310nm 波长 处的百分吸收系数为 453,肾上腺素在该波长处无吸收。请计算肾上腺素酮的限量。

A ?V E L ? 100 L? ? 100% W 0.05 ?1 453 ? 1 ? 100 ? ? 100% 2.0 ? 1 ? 10? 3 ? 0.06%
1% 1cm

2. 有关物质的检查 来源: 原料,中间体,副产物 一般方法: TLC 法的自身稀释对照法 HPLC 法的主成分自身对照法 PC 法用于极性较大的药物 四、含量测定 1. 非水碱量法 常用于有机碱性药物的含量测定 (详将见第四章……) 2. 溴量法 精密称取盐酸去氧肾上腺素 0.1085g, 臵碘瓶中, 加水 20ml 使溶解, 精密加溴滴定液 (0.05mol/L) 50ml, 再加盐酸 5ml,立即密塞, 放臵 15 分钟并时时振摇, 注意微开瓶 塞, 加碘化钾试液 10ml , 立即密塞, 振摇后,用硫代硫酸钠滴定液(0.0982mol/L)滴定,至 近终点时,加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消失,消

耗滴定液 14.35ml,并将滴定的结果用空白试验校正,消耗滴定液 46.46ml。每 1ml 溴滴定液(0.05mol/L)相 当于 3.395mg 的 C9H13NO2.HCl。

(V ? V)T F 含量% ? 0 ?100% W (46.46 ? 14.35) ? 3.395? 0.0982 ? ?100% 0.1085?1000? 0.05? 2 ? 98.7%

精密量取对照品溶液与供试品溶液各 15ml,分别臵 25ml 量瓶中,各加盐酸溶液(9 →100)5ml 与 0.1%亚硝酸钠溶液 1ml,摇匀,放臵 3 分钟,各加 0.5%氨基磺酸铵溶液 1ml,摇匀,时时振摇 10 分钟, 再各加 0.1%盐酸萘乙二胺溶液 1ml,摇匀,放臵 10 分钟,用盐酸溶液(9→100)稀释至刻度,摇匀,照紫 外-可见分光光光度法(附录 IV A) ,在 500nm 的波长处分别测定吸光度,计算,即得 (1)偶合剂: 碱性下用 β-萘酚 酸性下用 N-(1-萘基)-乙二胺 (2)氨基磺酸铵的作用: 除去过量的亚硝酸,避免其与偶合试剂显色 偶合剂 N-(1-萘基)-乙二胺遇亚硝酸也能显色,干扰比色测定,所以在重氮化后,应加氨基磺酸铵将剩 余的亚硝酸分解除去,再加偶合试剂 N-(1-萘基)-乙二胺。 4. HPLC 法 一般方法:离子对色谱法 离子抑制色谱法 例 16 盐酸异丙肾上腺素注射液: 为离子对色谱法,调节溶液 pH 为 3.0,加入离子对试剂庚烷磺酸钠 外标法定量 第三节 芳氧丙醇胺类药物的分析

一、结构与性质 1. 基本结构与代表药物 芳氧丙醇胺类药物结构中有芳环,并具有氨基丙醇侧链,基本结构为: 2. 主要理化性质 (1)弱碱性 (2)旋光性 (3)光谱特征 (4)溶解性:游离碱难溶于水,盐可溶于水 二、鉴别试验 1. 沉淀反应 盐酸普萘洛尔注射液的鉴别:取本品适量,加硅钨酸试液数滴,即产生淡粉红色沉淀。 2. 与高锰酸钾反应 部分药物分子结构中有双键,具有还原性 氧烯洛尔的鉴别:取本品 0.1g,加乙醇 2ml 溶解后,滴加 0.1mol/L 高锰酸钾溶液 1ml,高锰酸钾颜色消褪, 并产生红棕色沉淀。 3. 紫外光谱 富马酸比索洛尔的鉴别: 取本品, 加水溶解并分别稀释制成每 1ml 中约含 0.1mg 的溶液 (1) 和每 1ml 中

约含 0.01mg 的溶液(2) ,照紫外-可见分光光度法(附录 IV A)测定,溶液(1)在 271nm 的波长处有最 大吸收;溶液(2)在 223nm 的波长处有最大吸收。 4. 红外光谱 酒石酸美托洛尔的鉴别:取本品适量,加水溶解后,再加氨试液碱化,用二氯甲烷提取,静臵,取适量 二氯甲烷液,臵水浴上蒸干,臵五氧化二磷干燥器中放臵过夜, 依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对 照的图谱(光谱集 685 图)一致。 5. 色谱法 供试品溶液主斑点的位臵和颜色应与对照品溶液的主斑点一致。 三、特殊杂质检查 1. 游离萘酚的检查 加重氮苯磺酸试液 lml 如显色,与 ?-萘酚的乙醇溶液(每 lml 中含 ?-萘酚 20?g)0.30ml 用同一方法制成的 对照液比较,不得更深(0.3%) 。 2. 有关物质的检查 (TLC 法+HPLC 法) 四、含量测定 1. 非水碱量法 原料药大多用该法测定含量 2. 紫外分光光度法 3. 高效液相色谱法 按外标法以峰面积计算,即得。 第四节 苯并二氮杂?类药物的分析 一、结构与性质 1. 基本结构与代表药物 目前临床应用的 1,4-苯并二氮杂?类药物为取代苯环与七元含氮杂环并合而成的有机药物,基本结构 为:
7 6 5 1

对照品法定量

N

2 3

N
4

2. 主要性质 (1)弱碱性 可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应进行鉴别或非水碱量法测定含量。 (2)水解性 (3)光谱特征 二、鉴别试验 1. 化学鉴别法 (1)沉淀反应 氯氮?的鉴别:加碘化铋钾试液 1 滴,即生成橙红色沉淀。 阿普唑仑的鉴别:硅钨酸试液 1 滴,即生成白色沉淀 (2)水解后呈芳香第一胺反应 (3)硫酸-荧光反应 (4)分解产物的反应 三、有关物质的检查 四、含量测定 原料药:非水碱量法 加碘化铋钾试液 1 滴,即生成橙红色沉淀。 适用于氯氮?、奥沙西泮,地西泮无此反应。

加硫酸 3ml,振摇使溶解,在紫外灯(365nm)下检视,显黄绿色荧光。 有机破坏 氯化物的鉴别反应 HPLC 法

制剂:紫外分光光度法 高效液相色谱法 第五节 吡啶类药物的分析 一、结构与性质 1. 基本结构与代表药物

? ? N ? ?

吡啶类药物均含吡啶环,基本结构为: ? (二) 性质 (1)吡啶环 1)弱碱性 2)开环反应 戊烯二醛反应 二硝基氯苯反应 3)与碱共热分解出吡啶臭味 (2)二氢吡啶环 1)还原性 2)不稳定性 (3)取代基 1)酰肼基 2)酰胺基 (4)光谱特征 二、鉴别试验 1. 吡啶环的开环反应 还原性 pKb=8.8,非水碱量法

与生物碱沉淀试剂生成沉淀

氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法测定含量 易发生光化学歧化反应,其分析应避光操作,同时应检查引入的特殊杂质

弱酸性 缩合反应(与某些含羰基的试剂)

遇碱水解放出二乙胺↑

3)硝基——有氧化性,可被还原为芳伯胺基

适用范围:适用于吡啶环 ? 位未取代,β 或 γ 位被羧基衍生物取代者。 (1)戊烯二醛反应

尼可刹米 ?? ? ?? 戊烯二醛 [O]
H2N NH2

CNBr

联苯胺

苯胺
黄色

NH2

红色

113

尼可刹米

Ch.P.(2010)

【鉴别】 (2)取本品 1 滴,加水 50 ml,摇匀,分取 2 ml,加溴化氰试液 2 ml 与 2.5% 苯胺溶液 3 ml, 摇匀,溶液渐显黄色。 2) 二硝基氯苯反应 条件:无水、加热、碱性 吡啶及其衍生物 + 2,4-二硝基氯苯 共热 至熔融 醇制氢氧化钾 紫红色

2.

二氢吡啶的解离反应 丙酮或甲醇 溶解 氢氧化钠溶液 橙红色

二氢吡啶类药物(硝苯地平)

2. 缩合反应 异烟肼 + 芳醛 ------>腙(测熔点) 芳醛:香草醛、 对二甲氨基苯甲醛、水杨醛

5. 重氮化-偶合反应 6. 紫外光谱与红外光谱 7. 高效液相色谱法 三、特殊杂质检查 1. 异烟肼中游离肼的检查 杂质来源:原料残存、降解产生 检查方法:TLC、灵敏度法 供试品溶液 硫酸肼对照品 2. 有关物质 HPLC 法 外标法 对二甲氨基苯甲醛 供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应的位臵上,不得显黄色斑点。

不加校正因子的主成分自身对照法 注意——避光操作 四、含量测定 1. 氧化还原滴定法 (1)溴酸钾滴定法 异烟肼与溴酸钾反应的摩尔比为 3∶2 (2)溴量法 异烟肼与溴反应的摩尔比为 1∶2 (3)铈量法 原理:利用二氢吡啶类药物的还原性,与硫酸铈发生反应。硝苯地平与硫酸铈反应的摩尔比为 1∶2 2. 非水碱量法 利用吡啶环的碱性 尼可刹米的含量测定:取本品约 0.15g,精密称定,加冰醋酸 10ml 与结晶紫指示液 1 滴,用高氯酸滴定液 (0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色,并将滴定的结果用空白试验校正。每 1ml 高氯酸滴定液(0.1mol/L)相 当于 17.82mg 的 C10H14N2O。 3. 紫外分光光度法 4. 高效液相色谱法 第六节 吩噻嗪类药物的分析

一、结构与性质

CH3 N N S
2. 性质 (1)UV 母核为三环共轭大 π 体系 过氧化氢 (2)S 原子为-2 价,具有还原性,易氧化呈色 氧化剂:硫酸、硝酸、三氯化铁 (3)易与金属离子络和呈色 吩噻嗪(负二价 S )+金属离子 —— (4)弱碱性 母核 N 几乎无碱性,但其 10-取代基上的含 N 基团(脂烃胺基、哌啶基、哌嗪基) ,碱性较强 二、鉴别试验 1. UV 与 IR 例 盐酸氯丙嗪 Ch.P.(2010) 【鉴别】 (2)取本品,加盐酸溶液(9→1000)制成每 1ml 中约含 5?g 的溶液,照紫外-可见分光光度 法(附录Ⅳ A)测定,在 254nm 与 306nm 的波长处有最大吸收,在 254nm 的波长处吸光度约为 0.46。 (3)本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集 391 图)一致。 2. 显色反应 有色络合物 如钯离子比色法测定时,其氧化产物对测定无干扰。 氧化产物(砜及亚砜)有四个吸收峰,与母核吸收光谱有明显差异

CH3 Cl , HCl
盐酸氯丙嗪

(1)氧化反应 例 盐酸氯丙嗪 Ch.P.(2010) 红色 【鉴别】 (1)取本品约 10mg,加水 1ml 溶解后,加硝酸 5 滴即显红色,渐变淡黄色。 (2)与钯离子络合显色(未被氧化的药物) 3. 分解产物的反应 癸氟奋乃静的鉴别:取本品 15~20mg, 加碳酸钠与碳酸钾各约 0.1g,混匀,在 600℃炽灼 15~20min,放冷,加水 2ml 使溶解,加盐酸溶液(1→2) 酸化,滤过,滤液加茜素锆试液 0.5ml,应显黄色。 4. 色谱法 三、有关物质的检查 一般方法: TLC 法或 HPLC 法 注意: 避光操作,溶液临用新配 四、含量测定 1. 非水碱量法 利用吩噻嗪类药物 10 位取代基上脂烃胺基、哌啶基、哌嗪基的碱性,可在非水介质中直接用高氯酸滴定。 2. 紫外分光光度法 (1)吸收系数法 盐酸氯丙嗪注射液的含量测定: 避光操作。精密量取本品适量(约相对于盐酸氯丙嗪 50mg) ,臵 200ml 量瓶中,用盐酸溶液(9→1000)稀 释至刻度,摇匀;精密量取 2ml,臵 100ml 量瓶中,用盐酸溶液(9→1000)稀释至刻度,摇匀,照紫外可见分光光度法 (附录Ⅳ A) , 在 254nm 的波长处测定吸光度, 按 C17H19ClN2S〃HCl 的吸收系数为 915 计算, 即得。 (2)对照品比较法 3. 钯离子比色法 (2) 优点:专属性强 可选择性地用于未被氧化的苯并噻嗪类药物的测定。 4. HPLC 法 4. 高效液相色谱法 测定法: 精密量取本品适量(约相当于盐酸氟奋乃静 10mg) ,臵 50ml 量瓶中,用流动相 A 稀释至刻 度,摇匀,精密量取 10ml,臵 25ml 量瓶中,用流动相 A 稀释至刻度,摇匀,精密量取 20μl 注入液相色谱 仪,记录色谱图;另取盐酸氟奋乃静对照品,同法测定,按外标法以峰面积计算,即得。 第七节 沙坦类药物的分析

一、结构与性质 1. 基本结构与代表药物 沙坦类药物为 联苯四唑类化合物,基本结构为: 2. 主要理化性质 (1)酸性 本类药物四氮唑环上的 1 位氮原子上的氢有一定酸性,为中强酸,pKa 值为 5~6,可与碱成盐。 (2)弱碱性 (3)光谱特征

二、鉴别试验 1. 紫外光谱与红外光谱 2. 高效液相色谱法 3. 钾盐的鉴别 三、特殊杂质检查 缬沙坦中对映异构体的检查 四、含量测定 缬沙坦的含量测定:取本品约 0.4g,精密称定,加乙醇 25ml 溶解,加麝香草酚蓝指示液 5 滴,用氢氧化钠 滴定液(0.1mol/L)滴定至蓝色,并将滴定的结果用空白试验校正。每 l ml 氢氧化钠滴定液(0.1mol/L) 相当于 21.78mg 的 C24H29N5O3。 第三章含 羰基药物的分析 包括:酰胺类 第一节 苯磺酰胺类 酰胺类药物 P75

一、基本结构与典型药物 苯胺的酰基衍生物

R3 R1 R4
二、理化性质与鉴别试验 1. 芳香第一胺反应 本类均含潜在芳伯胺基,需先水解后使芳伯胺基游离 水解条件:酸性+加热 R3 和 R4 为均 H 水解速度受空间位阻的影响,故利多卡因、布比卡因与罗哌卡因等难水解 Ch.P.(2010)对乙酰氨基酚 盐稀酸 加热 40 分钟 2. 水解产物易酯化 酰胺键容易水解,可利用水解产物的性质来进行鉴别 对乙酰氨基酚和醋氨苯砜水解后产生乙酸 3. 三氯化铁反应 原理: 酚羟基 + FeCl3 →蓝紫色 如:对乙酰氨基酚 4. 与重金属离子发生沉淀反应 酰胺基和脂烃胺侧链上的 N 在水中与铜离子或钴离子络合生成配位化合物,可溶于三氯甲烷中呈色。 例如:盐酸利多卡因 亚硝酸钠 碱性 β-萘酚 显红色

N C R2 H O

5. UV 法 6. IR 法 7. HPLC

苯环 Ch.P.标准图谱对照法 USP 对照品法 利用含量测定项下的色谱图

三、特殊杂质的检查 1. 对乙酰氨基酚中特殊杂质检查 生产工艺: (1)乙醇溶液的澄清度与颜色 (产生原因)铁粉→浑浊; 对氨基酚氧化后的醌式产物,呈色 (2)对氨基酚及有关物质 取本品适量,精密称定,加溶剂[甲醇-水(4:6)]制成每 1ml 中约含对乙酰氨基酚 20mg 的溶 液,作为供试品溶液(临用新制);另取对氨基酚和对乙酰氨基酚对照品适量,精密称定,加上述溶剂制成每 1ml 中约含对氨基酚 1?g 和对乙酰氨基酚 20?g 的溶液,作为对照品溶液。精密量取供试品溶液与对照品溶 液各 20?l,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主峰保留时间的 4 倍;按外标法以峰面积计算,含对氨基 酚不得过 0.005%,其他杂质相对于对照品溶液色谱图中对乙酰氨基酚峰面积计算,单个未知杂质不得过 0.1%,杂质总量不得过 0.5%。 (3)对氯苯乙酰胺 检查方法:HPLC 极性较弱,需提高流动相中甲醇比例 磷酸盐缓冲液-甲醇(60:40) 2. 醋氨苯砜中特殊杂质的检查 杂质来源:水解产生氨苯酚 检查方法:TLC 法、杂质对照品法 显色剂是什么?显色原理? 四、含量测定 1. UV 法 用吸收系数法定量; 用对照法定量; 对乙酰氨基酚 Ch.P.(2010) 2. 亚硝酸钠滴定法 3. 非水溶液滴定法 目的:增大滴定突跃,使滴定顺利进行 叔胺 N 有弱碱性 4. HPLC 法 第二节 苯磺酰胺类药物 外标法检查

一、基本结构与分类 二、理化性质及鉴别试验 1. 酸碱两性 磺酰胺基、氨基 可溶于酸或碱 2. 芳伯氨基 重氮化-偶合反应 亚硝酸钠滴定法 与芳醛的缩合反应

3. 4. 6.

与金属离子反应 磺酰胺基上的活泼氢 测定 mp. 有机胺臭气 S、F、Cl 的鉴别

5. 分解反应 7. UV 和 IR 8. HPLC 法 三、特殊杂质的检查 1.酸度 ? ? ? ?

为什么查?磺胺类药物精制过程中引入乙酸 如何查?酸碱滴定法 磺胺类被氧化生成偶氮苯化合物 微量的 Fe3+和 Ca2+,影响澄清度

2.碱性溶液的澄清度与颜色

3.芳香第一胺的检查 检查原理: 酸性下重氮化并于二盐酸萘乙二胺偶合显色,与 518nm 处测定吸光度进行控制。 四、含量测定 1. 亚硝酸钠滴定法(永停滴定法) 2. 酸碱滴定法 (1)乙醇溶液中直接酸碱滴定 (2) 非水酸量法 溶剂: 二甲基甲酰胺 滴定液:甲醇钠滴定液 指示剂:偶氮紫指示液 3. 紫外-可见分光光度法 直接紫外分光光度法 注意两性化合物,pH 值对紫外吸收光谱有显著的影响 4. HPLC 法 多组分同时测定 外标法定量 第四章 第一节 ? ? 生物碱类药物的分析 结构与性质 生物碱的概念 结构分类 黄嘌呤类 一、苯烃胺类 1. 2. 结构特点: N 原子不在环状结构内,而在烃基侧链上 性质: A. B. C. 仲胺碱性较强的,易与酸成盐;酰胺碱性很弱,游离 旋光性 UV 和 IR 生物碱是生物体内含氮碱性有机化合物的总称。 喹啉类 吲哚类 托烷类 异喹啉类 常见的有六类: 苯烃胺类

二、托烷类(莨菪烷类) 1. 2. 结构特点: 由莨菪烷衍生的氨基醇(莨菪醇)和有机酸(莨菪酸)缩合的酯 性质: A. B. C. D. 三、喹啉类 1 结构特点: 包括喹啉环和喹核碱两部分 2. 性质: 碱性 旋光性 UV 荧光 四、异喹啉类 性质:吗啡为两性化合物 1. 碱性 2. 旋光性 3. UV 与 IR 五、吲哚类 结构特点:含两个不同碱性的 N 原子 1. 碱性 2. 含酯键,易水解 3. 旋光性 4. UV 和 IR 六、 黄嘌呤类 ? 结构特点: 由嘧啶环与咪唑环骈 合而成的二环化合物 ? 性质: 1.四个 N 原子无碱性 2.咖啡因 PKb=14.15, 不与酸成 盐,溶于水。 3.茶碱有活泼 H,呈酸性。 生物碱类药物的通性 1. 碱性 胍基>季铵碱>脂肪胺、脂环胺>芳胺、N-芳杂环>酰胺 小檗碱>麻黄碱、阿托品>罂粟碱>咖啡因 吗啡具酸碱两性 2. 溶解性 游离生物碱不溶或难溶于水,能溶或易溶于有机溶剂,在稀酸中成盐而溶解; 生物碱盐类易溶于水,不溶于有机溶剂 五元脂环 N,碱性较强 酯易水解 旋光性 UV 和 IR

3. 旋光性 一般多为左旋体有效,少数为右旋体或消旋体。 4. 光谱特性 第二节 鉴别试验 一、鉴别试验 (一)物理常数鉴别法 熔点和旋光度 例:磷酸可待因 样品约 0.2g---sol.----+氢氧化钠----沉淀→过滤→洗涤→105℃干燥 1hr,测 mp.应为 154~158℃。 (二)化学鉴别法 1. 显色反应 大多生物碱+显色试剂→不同颜色 1)显色试剂 浓硫酸、浓硝酸、钼硫酸、钒硫酸、甲醛-硫酸、对二甲氨基苯甲醛、香草醛、三氯化铁等 2)显色机理 脱水、氧化或缩合后形成共轭双键 2. 沉淀反应 生物碱+沉淀剂 常用沉淀剂: (1)重金属盐类 KBiI4、K2HgI4、KI-I2、HgCl2 (2)大分子酸类 磷钼酸、硅钨酸、苦味酸、苦酮酸 (1)咖啡因的鉴别:加碘试液 5 滴,不生沉淀 再加稀盐酸 3 滴即生成红棕色的沉淀,并能在稍过量 的氢氧化钠液中溶解。 (2)高三尖杉酯碱的鉴别:碘化铋钾试液 1 滴,即生成桔红色沉淀。 3. 特征鉴别反应 (1)双缩脲反应 芳环侧链氨基醇结构的反应 → 沉淀

(2)Vitaili 反应 托烷生物碱(阿托品、东莨菪碱、山莨菪碱 )的特征反应 托烷生物碱 --水解---莨菪酸---+发烟硝酸---黄色三硝基衍生物 ---醇制氢氧化钾---醌式化合物 (紫红色) (3)绿奎宁反应 结构中 6 位含氧喹啉衍生物

奎宁 NH3 ? H 2O Br 或Cl2 ??2?? ?? ??? ??? 奎尼丁

翠绿色

(5)异喹啉生物碱的特征反应 1) Marquis 反应 含酚羟基的异喹啉生物碱的特征反应

盐酸吗啡 ?? ? ? ?? 紫堇色 醌式结构
2)Frohed 反应 吗啡生物碱的特征反应,Ch.P.(2010)用于盐酸吗啡的鉴别

甲醛 ? 硫酸

.? 紫色 ? 蓝色 ? 棕绿色 盐酸吗啡 ?钼硫酸 ? ? ?TS ? ?
3)还原反应

吗啡 ? 铁氰化钾 ? 亚铁氰化钾
亚铁氰化铁 Fe4[Fe(CN)6]3 ?三氯化铁 ? ? ??? 普鲁士蓝(蓝绿色) (6)吲哚类生物碱的特征反应 吲哚环上 β 位氢较活泼,能与芳醛缩合 1)与香草醛反应 利血平 + 新制香草醛→玫瑰红色 2)与对二甲氨基苯甲醛反应

利 血 平? 对 二 甲 氨 基 苯 甲 醛 冰醋酸、硫酸 冰醋酸 ?? ? ? ? ??? 绿 色 ?? ? ?? 红 色
(三)光谱法 1. UV 法 生物碱类药物大多含有芳香环或共轭双键结构,有特征紫外吸收,采用 UV 法进行鉴别: 规定吸收波长法(λmax、λmin) 规定吸收波长和吸收度比值法 2. IR 法 3. 荧光特征(部分生物碱本身或经酸处理后) (四)色谱法 1. TLC 法 常用硅胶为吸附剂:游离生物碱,尤其是生物碱盐类吸附太牢,造成严重拖尾。 解决方法: (1)展开剂中加入碱性试剂(如氨水、二乙胺、吡啶) (2)用硅胶铺板时加碱液(如氢氧化钠) (3)改用其他吸附剂(如氧化铝板) 2. HPLC 法、GC 法、PC 法

第三节

特殊杂质的检查

一、不溶物的检查 例:硫酸奎尼丁中三氯甲烷-乙醇中不溶物的检查 二、旋光性杂质的检查 如:硫酸阿托品中莨菪碱的检查旋光度测定法、比较法 三、氧化产物的检查 如:利血平中氧化产物的检查 UV 法、比较法 四、有关物质的检查 1. HPLC 法 如:硫酸长春新碱中有关物质的检查梯度洗脱 2. TLC 法 如:马来酸麦角新碱中有关物质的检查母体药物对照法 TLC 法用于药物中特殊杂质的检查 1.杂质对照品法 2.供试品溶液的自身稀释对照法 3.杂质对照法与供试品自身稀释对照法并用(两法并用) 4.母体药物对照法(对照药物法) 当杂质斑点颜色与主斑点颜色有差异时应用,要求对照药物合格且稳定性好 第四节 含量测定 一、非水溶液滴定法 目的:增大滴定突跃 非水酸量法 非水碱量法 (一)原理 B + HClO4 1.溶剂 ①冰醋酸 ②冰醋酸+醋酐 ③醋酐(+惰性溶剂) ① ② 10 12 ③ →BH+〃ClO4- BH+〃A-+ HClO4 → BH+〃ClO4-+HA P96

pKb
2.滴定剂 高氯酸的冰醋酸溶液 3.指示终点的方法

8

常用电位法和指示剂法 1)指示剂法 A. 结晶紫——滴定不同碱性药物的终点颜色不同

紫→蓝→蓝绿→绿→黄绿→黄 (碱式色) ( 酸式色)

B.

喹那啶红——无色→黄色 电极系统: A. B. 特点: A. B. 准确但操作繁琐 确定指示剂的变色点颜色 指示电极——玻璃电极 参比电极——甘汞电极(内装饱和 KCl 的无水甲醇液)

2)电位法(基本方法)

(二)方法 一般用半微量法 冰醋酸 溶解 指示液 1~2 滴 注意事项: 1) 2) 3) 4) △t: 为标定滴定液时的温度与使用滴定液时的温度之差 △t>10℃ → 重新标定 △t≤10℃ → 按校正公式重新计算浓度 (三)原料药的测定 1. 有机弱碱的测定 如咖啡因,碱性极弱,不能成盐,呈游离状态,须加入醋酐,使滴定突跃增大,终点敏锐。 终点颜色:黄色 2. 生物碱盐的测定 BH+〃A-+ HClO4 ———>BH+〃ClO4-+HA 无机酸类在醋酸中的酸性排序: HClO4>HBr > H2SO4 > HCl >HAc > HSO4- > HNO3 > H3PO4 (1)有机酸盐和磷酸盐类 臵换出的 HA 酸性较弱,不干扰;若 HA 不溶于冰醋酸,干扰终点观察,可碱化后有机提取,再行非水 滴定。 (2)氢卤酸盐类 HX 酸性较强,干扰, 1)一般先加入过量的醋酸汞的冰醋酸溶液,使生成难以解离的卤化汞,再行滴定。 2BH+X- + Hg(Ac)2 →2BH+〃Ac- + HgX2 2)考虑到毒性较大,也可不加醋酸汞,可加入醋酐后电位法指示终点 (3)硫酸盐类 H2SO4 在水中为二元酸,但在非水介质中只显示一元酸 例 1:硫酸阿托品 一分子中含 2 个碱性 N,反应 mol 比 1:1,即 1:(n-1) 例 2:硫酸奎宁 一分子中含 4 个碱性 N,反应 mol 比 1:3 ,即 1:(n-1) (4)硝酸盐类 加入计算量的醋酐 HClO4 滴定液的校正及重新标定 配制滴定液时防止爆炸 浓 HClO4 不能与醋酐接触,可先用 g.HAc 稀释 试剂易挥发性的干扰,消除可以做空白试验 V=V 样-V0 高氯酸滴定液 颜色以电位滴定时的突跃点为准 结果用空白试验校正

mol/ LT ?

(mol/ L)T0 1 ? 0.0011 (T ? To)

干扰 : BH+〃NO3- +HClO4→BH+〃ClO4-+HNO3 HNO3 有氧化性,破坏指示剂的变色 排除 : 改用电位法指示终点或加入还原剂 VitC 如硝酸毛果芸香碱 3. 制剂的测定 (1)片剂 干扰:硬脂酸盐、苯甲酸盐、CMC-Na 排除:碱化后有机提取 硫酸奎宁片(反应 mol 比 1:4) (2)注射剂 干扰:水分 排除: 1)若供试品热稳定性好,则水浴蒸干后依法测定; 2)若供试品热稳定性差,则可碱化后有机反复提取完全,蒸去溶剂后按原料药项下方法测定。 注射液,直接滴定法,同时进行空白试验,测定结果按下式计算: 精密量取本品 20ml,加氨试液 5ml,用异丙醇-三氯甲烷(1∶3)提取 5 次,每次 15ml,提取液分别 用同一份水 7ml 洗涤,静臵待分层后,分取三氯甲烷液,臵锥形瓶中,合并提取液,臵水浴上蒸干,加无 水乙醇 2ml,蒸干后,再加无水乙醇 2ml,蒸干至无乙醇臭,放冷,加三氯甲烷 20ml、冰醋酸 30ml、醋酐 3ml 与结晶紫指示液 2 滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显纯蓝色,并将滴定的结果用空白试验 校正。每 1ml 高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于 39.23mg 的 C19H21NO3〃HBr。

T ?V-V0 ?F VS 标示量% ? ?100% 标示量 c 39.23? ?V-V0 ?? 0.1 20 . 00 ? ? 100% 标示量
二、提取酸碱滴定法(提取中和法) 碱性较强(pKb6~9)的生物碱盐 / 游离生物碱 / (一)基本原理 ? 1.碱化 目的:使生物碱游离 常用:NH3〃H2O、NaHCO3、NaOH、Ca(OH)和 MgO 强碱不宜用于下列药物的游离: 含酚结构的、含酯结构的、含脂肪共存物的药物 依据:生物碱盐类可溶于水,游离生物碱难溶于水而溶于有机溶剂。 有机溶剂 提取液(中和法) 碱化试剂

为何氨水是最常用的碱化试剂? 因为氨水碱性中等,能使大多数生物碱游离;不易使酯水解;不易与酚成盐;不形成乳化;多余的易挥发 除去。 2.有机溶剂提取 ? 选择原则: 1) 2) 3) 4) ? 与水不相混溶 沸点低,易挥发 能选择性溶解生物碱 对碱化试剂和生物碱应化学惰性 三氯甲烷 1) 2) ? 乙醚 1) 2) 3) 最常用,但不能使用于: 碱性较强的生物碱 不溶于三氯甲烷的生物碱(如吗啡) 应用不如三氯甲烷广泛,因为: 在水中有一定的溶解度(中性盐) 沸点太低 醚溶性生物较少

常用:三氯甲烷、乙醚

用量及提取次数: 一般提取 4 次,第一次至少为水液体积的 1/2,以后 3 次各为第一次的 1/2。 ? 提取终点的确定 H+ 提取液 ----------->挥尽有机溶剂 △ 乳化的预防与消除 (1)预防: 1) 2) (2)处理:P403 3. 测定 用碱性较弱的碱化试剂 尽力避免猛烈的振摇 生物碱沉淀剂 -----------> 不得有↓

① ~ ⑥

三、紫外-可见分光光度法 (一)直接紫外-可见分光光度法 1. 2. 对照品比较法 吸收系数法

(二)酸性染料比色法

注射剂

标示量% ?

c实测 ?100% c标示

四、荧光分析法 五、色谱法 1. GC 法 游离生物碱——直接分析 盐——碱化后有机提取再分析 含酚羟基的——衍生化后分析 2. 高效液相色谱法 ——主要用反相 流动相:甲醇-水或乙腈-水 分析有机碱类药物的特点: 色谱峰拖尾,分离效能下降,保留时间过长,甚至长期地保留在色谱柱上。 解决方法: (1)加扫尾剂法 依据物质的极性及溶解性。在流动相中加入扫尾剂,最常用的扫尾剂是三乙胺、二乙胺 (2)加离子对试剂 分析弱碱性药物时,常用烷基磺酸盐 戊烷磺酸钠 庚烷磺酸钠 辛烷磺酸钠 十二烷基磺酸钠 (3)离子抑制色谱法 (4)用覆盖度大的固定相或封端填料 第五章 第一节 抗菌药物与抗生素类的分析 喹诺酮类抗菌药物的分析 HPLC 固定相:十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)

一、基本结构与典型药物 4-喹诺酮-3-羧酸 二、性质 1. 酸碱两性 2. 溶解性 3. 旋光性 4. 不稳定性 6. UV 和 IR 7. 有机氟化物的反应 二、鉴别试验 (一)与丙二酸的呈色反应 对叔胺有选择性 喹诺酮类+丙二酸+醋酐→共热显色 (二)有机氟化物的反应 (三)光谱法(UV 及 IR) (四)色谱法(TLC 及 HPLC) 见光分解,产生光毒性 如钙、镁、铁和锌离子极易被形成螯合物 5. 与金属离子反应 在水、乙醇中溶解度小;酸水或碱液中有一定溶解度

三、特殊杂质的检查 (一)吡哌酸“碱性溶液澄清度”的检查 控制碱性不溶性杂质 (二)盐酸环丙沙星“酸度”检查 盐类药物显酸性,控制药物中的游离体 (三)吸光度 药物本身无色,控制有色杂质 四、含量测定 (一)非水溶液滴定法 1. 2. 非水碱量法 非水酸量法

(二)紫外分光光度法 (三)HPLC 法

第二节

β-内酰胺类抗生素青霉素族和头孢菌素族

一、结构与性质

2. 性质 (1)酸性及溶解度: 游离-COOH,具有酸性 与无机碱成盐,碱金属盐易溶于水,遇酸析出白色↓ 与某些有机碱成盐,有机碱盐难溶于水,易于甲醇等有机溶剂 (2)旋光性: 青霉素族含 3 个手性碳(C3、C5、C6) 头孢菌素族含 2 个手性碳(C6、C7) 如: 5%头孢唑啉钠溶液 –18~–24° (3)紫外吸收特征: 青霉素族母核无吸收,侧链若有苯环或萘基共轭系统则有吸收。 头孢菌素族母核有吸收,一般在 260nm 附近。 (4)不稳定性: β-内酰胺环是活性中心 干燥纯净→稳定 水溶液 → 不稳定 在水溶液中,易受酸、碱、酶、金属离子或氧化剂的影响,发生水解和分子重排。 二、鉴别试验 现版各国药典主要采用方法: IR HPLC 又是不稳定性因素 四元环张力大 酰胺键易水解

TLC 呈色反应 (一)色谱法 对照品法 (二)光谱法 1. 2. UV 法 IR 对照方法 1) 标准图谱对照法 2) 对照品对照法 1. TLC 法 2.

比较R f 和斑点颜色 HPLC 法 比较t R

2. 茚三酮反应(氨苄基)

? ? 氨基酸结构 ?茚三酮 ? ??? 蓝紫色
S N CH3 CH3 COOH

CH NH2

COHN O

(四)各种盐的反应 钾、钠盐的火焰反应 重氮化-偶合反应 三、特殊杂质的检查 (一)吸光度 青霉素钠 Ch.P .(2010) 【检查】吸光度 取本品,加水制成每 1ml 中含 1.80mg 的溶液,照紫外-可见 分光光度法(附录Ⅳ A) , 在 280nm 的波长处测定吸光度,不得大于 0.10;在 264nm 的波长处有最大吸收,吸光度应为 0.80~0.88。 (二)青霉素聚合物 可引发速发型过敏反应 主要分离分析方法:凝胶色谱分析法 凝胶色谱具有分子筛的作用,让药物分子自由的进入凝胶颗粒表面,而高分子杂质被排阻,不能进入颗粒 内部;色谱过程中凝胶对药物的吸附作用大于对高分子杂质的吸附作用,可使高分子杂质与药物分离。 四、含量测定 1. UV 法 2. HPLC 法 钾、钠盐水溶液的鉴别 火焰分别呈紫色、鲜黄色 普鲁卡因青霉素的鉴别 水溶液显碱性,遇酸析出沉淀,沉淀溶于过量的盐酸或有机溶剂中

第三节 氨基糖苷类抗生素 一、基本结构与典型药物 基本结构: 结构特点: 1)链霉素 链霉胍 链霉双糖胺 2)链霉胍上有 2 个碱性中心,胍基碱性较强;氨基糖上有 1 个碱性中心 3)可与无机酸或有机酸成盐,临床常用其硫酸盐 庆大霉素 C 复合物: 结构特点: (1) 有 5 个碱性中心,碱性相似(pKa~8) (2)可与无机酸或有机酸成盐 (3)为庆大霉素 C 复合物,主要成分 C1、C2、C1a、C2a 二、理化性质: 1. 2. 碱性:均为碱性化合物,分别有 3 个、5 个碱性中心,能与酸成盐,临床多用其硫酸盐。 溶解性:硫酸盐易溶于水,不溶于乙醇、三氯甲烷和乙醚。 苷键:二糖胺间的苷键,结合较牢;苷元与糖胺间的苷键,结合较弱。 4. 颜色反应(供鉴别) 5. 光谱特征 (1)UV (2)IR 二、鉴别试验 (一)茚三酮反应 链霉素于 230nm 有吸收;其他药物无吸收。

缩合 氨基糖 ? 苷元 ???? 氨基糖苷

3. 水解反应

α - 羟基胺类 茚三酮 ????? 蓝紫色 α - 氨基酸
(二) Molisch 反应

五碳糖 六碳糖

?H ? ??

?

糠醛 ?? 萘酚 ?? ? ? ?? 呈色 羟甲基糠醛

(六)硫酸盐的反应 (七)色谱法 (八)光谱法 三、特殊杂质检查 (一)链霉素中链霉素 B 的检查 链霉素 B 又称甘露糖链霉素 来源 效价 方法 发酵时菌种产生 链霉素的 20~25% TLC,以一定量的 D-甘露糖为对照,加热回流 1h

(二)庆大霉素 C 组分测定 庆大霉素 C 复合物中 C1、C2、C1a 三种主要组分的生物活性、毒副作用和耐药性均有差异,故不能只据总 效价判断,须控制三者的相对含量,以确保用药的安全有效。 采用 HPLC 法控制庆大霉素 C 各组分的相对含量。 四、含量测定 1. 微生物检定法 硫酸链霉素 Ch.P.(2010) 【含量测定】精密称取本品适量,加灭菌水定量制成每 1ml 中约含 1000 单位的溶液,照抗生素微生物检定 法(附录Ⅺ A 管碟法或浊度法)测定, 1000 链霉素单位相当于 1mgC21H38N7O12。 2. HPLC 法 本类药物无紫外吸收,如何解决检测困难的问题? (1)柱前或柱后衍生化 (2)采用电化学检测器 (3)采用蒸发光散射检测器 第四节 四环素类抗生素 又称四环素族抗生素,可看作四并苯或萘并萘的衍生物 一、基本结构与药物

R D
10

R' R" C O

R'''
5

H A OH

N(CH3)2
4

B
12

OH CONH2

1

OH

OH

O

二、理化性质 1. 酸碱两性 遇酸、碱均能生成相应的盐,临床多用盐酸盐。 酚羟基、烯醇羟基——弱酸性 二甲胺基——弱碱性 2. 溶解性 3. 旋光性 4. 光谱特性 5. 色谱特性 6. 盐酸盐反应 7. 不稳定性 本类药物对酸、碱及各种氧化剂都是不稳定的。 水溶液中易发生降解或异构化反应;被氧化后颜色变深 差向异构化及降解反应 1)弱酸性(PH2~6)下的差向异构化反应,生成差向四环素(ETC) 2)酸性(PH<2)下的降解反应 3)碱性下的降解反应,变成异四环素 三、鉴别试验 1.HPLC 法 一法多用(鉴别、检查、含量测定) 例 盐酸四环素 Ch.P.(2010) 【鉴别】 (2)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品主峰的保留时间应与盐酸四环素对照品主峰 的保留时间一致。 2. TLC 薄层板:硅藻土 斑点的检出:利用本类药物及其降解产物与 365nm 紫外灯下产生荧光 注意: 防拖尾 3. IR 法 4. UV 法 5.显色法 1)浓硫酸反应 原理:氧化、脱水 现象:各呈不同颜色,可用于区别 2)三氯化铁反应 原理:酚羟基与三氯化铁的反应 现象:各呈不同颜色,可用于区别 四、特殊杂质检查 1. 有关物质(HPLC ) 包括:OTC、ETC、ATC、EATC 和 CTC Ch.P.(2010)用 HPLC 法检查 于固定相及流动相中加入 EDTA 控制合适的 pH 值(因本类药物呈酸碱两性) 游离碱水溶性小,其盐酸盐易溶于水,并溶于碱或酸性溶液。 手性碳

危害:影响产品外观质量;是临床上引起毒性反应的主要物质 (加校正因子的主成份自身对照法) 2. 杂质吸收度 四环素类药物产生异构化和降解反应后会发生颜色改变。 检查方法:规定一定溶剂、一定浓度、一定波长下杂质吸光度的限量 五、含量测定 目前各国药典多用 HPLC 法,以盐酸四环素为例: 固定相:十八烷基硅烷键合硅胶 流动相:调 pH8.5 紫外检测:280nm 第六章 维生素类药物的分析 维生素是维持人体正常代谢功能所必须的一类生物活性物质。体内不能自行合成,必须由食物供给。 1. 从结构上看,可以是: 醇、酚、酯、醛、胺、酸,无系统分类。 2. 从溶解性能分: 脂溶性:VitA、VitD、VitE、VitK 水溶性:VitB 族、泛酸、VitC(抗坏血酸) 、VitM(叶酸) 、 VitPP(烟酸) 第一节 维生素 A 有共轭多烯侧链的环己烯,有许多立体异构体 是指全反式维生素 A 醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液。 一、结构及性质 (一)结构 (二)性质 1. 脂溶性 易溶于乙醚、三氯甲烷,不溶于水。 2. 不稳定性 多烯侧链不稳定,易被氧化,易被光解 3.具紫外吸收 二、鉴别试验 (一)三氯化锑反应 维生素 A 因为: 水——使三氯化锑水解为氯化氧锑; 醇——破坏正碳离子 注意:仪器试剂应干燥,用无醇三氯甲烷 (二)紫外光谱法 BP (三)TLC BP USP 三、含量测定 (一)紫外分光光度法(三点校正法) 对照品法 显色剂: 三氯化锑 规定斑点的颜色与 Rf 值 显色剂:磷钼酸 测 λmax348,367,389nm; 332 处有拐点 + SbCl3 即显蓝色,渐变成紫红色。 条件:无水、无醇 最大吸收在 325~328nm 4.与三氯化锑呈色 《中国药典》收载的维生素 A

收载于药典附录 1. 为什么要校正? 维生素 A 在 325~328nm 处最大吸收,但制剂中常含有如立体异构体、氧化产物及光照产物、合成中间 体、去氢维生素 A、去水维生素 A 等杂质,在 325 ~328nm 处也有吸收,需进行校正。 2. 原理 依据: 1)杂质吸收在 310-340nm 范围内呈负斜率线性。 2)物质对光吸收具有加和性。 三点校正法:于三点不同波长处分别测得吸光度,据校正公式计算 (A 校),再计算含量。 3. 三点波长的选择 A.第一法,又称等波长差法 λ3- λ1= λ1- λ2 , 中国药典第一法测定维生素 A 醋酸酯时,规定 ?1=328 nm,?2=316 nm,?3=340 nm。 A328(校正)=3.52(2A328 - A316 - A340) 4.生物效价、换算因数和计算法 维生素 A 的计量单位以 IU 表示,其国际单位规定如下: 1IU=0.344mg 维生素 A 醋酸酯(纯品) (2907000IU=1g 维生素 A 醋酸酯) 1IU=0.300mg 维生素 A 醇(纯品) (3330000IU=1g 维生素 A 醇) 计算法: (1)求供试液的 如以 g/ml 为单位,则 (2)求效价 (3)求制剂的含量 :
1% E1 cm ?

A=ELC,C=A/EL(C 的单位 g/100ml)

A 100 C

1% 效价 ? 换算因数 ? E1 cm

标% ?
5. 测定方法 (1)操作方法

效价(IU / g) ?W (g / 粒) 标示量(IU / 粒)

第一法: (适用于维生素 A 醋酸酯) S→精密称定----->sol.(9~15IU/ml),于 300、316、328、340 和 360nm 波长处测定吸光度,并确定最大 吸收波长是否在 326~329nm 之间,并计算五个吸光度比值 (2)A 值的选择及判断法则 ? ? ? λmax 不在 326~329nm 之间,皂化法测定。 λmax 在 326~329nm 之间,且五个吸光度比值差均不超过〒0.02,以 A328 计算含量 λ max 在 326~329nm 之间,而五个吸光度比值差中有超过〒 0.02 的,应计算: m

?

6. 注意事项 (1)勿强烈振摇,避免乳化 (2)仪器波长的校正 (3)半暗室中快速测定,防止 VitA 被氧化 (二)高效液相色谱法 色谱条件(正相) : 固定相:硅胶 流动相:正己烷-异丙醇(997:3)

A 328 校 正 ? A 328 ? 100% A 328

(三) 三氯化锑比色法 1.原理: 维生素 A 与三氯化锑的无水三氯甲烷溶液作用,产生不稳定的蓝色,在 618~620nm 波长处有最大吸收, 符合 Beer 定律。 2.方法: (标准曲线法) 3.注意: A. B. C. D. E. 第二节 反应条件较严——无水、无醇 要求操作迅速,因产生的蓝色不稳定 温度对呈色强度影响较大,测定温差应<1℃ 专属性差(目前只用于食品及饲料中维生素 A 的测定) SbCl3 的强腐蚀性和毒性。 维生素 B1

一、结构与性质 1. 维生素 B1(盐酸硫胺)是由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季铵化合物

2. 噻唑环上季铵及嘧啶环上的氨基为两个碱性基团,可与酸成盐 (二)性质 1. 溶解性 3. UV 4. 碱性 盐酸盐易溶于水,水溶液呈酸性 维生素 B1 的特征反应 2. 硫色素反应

盐酸溶液中, λmax=246, 噻唑环上的季胺与嘧啶环上的氨基为弱碱性,与生物碱沉淀剂生成沉淀

二、鉴别试验 (一)硫色素反应 Vit.B1---碱---氧化剂---硫色素---- 正丁醇-- 醇层蓝色荧光 (可逆) 特点: 灵敏度高、专属性强,为 Vit.B1 所特有。 (二)沉淀反应 沉淀剂包括: 重金属盐类(K2HgI4、KI-I2) 大分子酸类(硅钨酸、苦酮酸) (三)氯化物反应 (四)硫元素反应 ——加碱分解后与醋酸铅反应 维生素 B1 与 NaOH 共热分解,产生 Na2S ,可与 Pb(NO3) 2 或 PbAc2 反应生成 PbS 的黑色沉淀。 (五)IR 法 三、含量测定 (一)非水溶液滴定法 (二)紫外分光光度法 反应 mol 比 1:2 OH- H+ 荧光消失

标示量%=

A:吸光度

AVnW ?100% 1% 100E1 cmWB

V:溶解、定容的体积 n:稀释倍数 W:称取的维生素 B1 片粉重 W:平均片重 (三)硫色素荧光法 一定条件下生成的硫色素与 VitB1 的量成正比 (四)硅钨酸重量法 原理:维生素 B1 在酸性溶液中与硅钨酸作用产生组成恒定的沉淀,据沉淀及供试品重量即可计算含量。 第三节
CH 2OH 6 H C OH 5 O
4 3 2 1

维生素 C

O OH

HO

维生素 C 是一种不饱和的多羟基内酯化合物。又称 L-(+)-抗坏血酸 易溶于水,难溶于有机溶剂

一、结构与性质 1. 溶解性 3. 光学活性 两个手性碳原子(C4、C5) 四个光学异构体 以 L -(+)型活性最强 4. 酸性(共轭效应) 一元酸 5. UV(共轭双键) 稀矿酸: 6. 水解(内酯环) 7. 还原性 分子中的烯二醇结构具极强的还原性,极易被氧化,常用作其他制剂的抗氧剂 二、鉴别试验 (一)利用维生素 C 的还原性 VitC -----氧化剂----去氢 VitC 1. 硝酸银反应 VitC 2. VitC + AgNO3 + 2,6-二氯靛酚 玫瑰红色 (二)糖类的反应 (三)UV 法 三、杂质检查 (一)溶液的澄清度与颜色杂质实际上是糠醛聚合物 (二)铁、铜离子的检查原子吸收分光光度法法 BP(2010) 维生素 C 在 0.01mol/L 的盐酸溶液中,于 243nm 有唯一的最大吸收,吸收系数为 545~585 之间。 去氢 VitC + Ag 变为 变为 酚亚胺 无色 2,6-二氯靛酚反应 PKa1=4.17 245nm PKa2=11.57 中性或碱性: 265nm 2. 糖类的性质

3. 使亚甲蓝、高锰酸钾、酒石酸铜等褪色

四、含量测定 (一)碘量法 原理:维生素 C 的还原性 VitC + I2 (反应生成) 反应 mol 比 1:1 去氢 VitC + HI 淀粉指示剂

(1)加新沸过的冷水 减少水中氧对 VitC 的氧化干扰 (2)加稀醋酸 酸性介质中 VitC 不易被空气氧所氧化 (3)立即 片剂: 防止空气氧又溶解 溶解后过滤 (4)附加剂的干扰 注射液: 加丙酮掩蔽处方中的抗氧剂亚硫酸氢钠 (二)2,6-二氯靛酚滴定法 VitC + 2,6-二氯靛酚 (反应生成) 酚亚胺 指示剂:2,6-二氯靛酚 自身指示终点法 条件: (1)酸性(HAc-HPO3) 稳定 VitC (2)快速滴定 防止其它还原性物质的干扰 (3)滴定液要临用前标定 专属性较碘量法高,多用于制剂 第五节
CH3 CH3 O CH3CO CH3 O

维生素 E
CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 维生素 E

a-生育酚醋酸酯 一、结构与性质 1. 2. 3. 4.

维生素 E 有 8 种异构体,以 a-异构体生理活性最强。

天然品为右旋体,合成品为消旋体 具有紫外吸收 易被氧化 溶解性 在氧化剂条件下可进一步氧化为醌式化合物 维生素 E 具有还原性,酯键水解生成游离生育酚,还原性增强

酯键(乙酰化的酚羟基) 易水解,生成游离酚羟基 二、鉴别试验 (一)HNO3 反应 三、检查 (一) 酸度 (二) 游离生育酚 检查原理: 生育酚 + 2Ce4+ (反应生成) 生育醌 生育红,又称生育醌 血红色 (二) 三氯化铁-联吡啶反应

检查生产过程中引入的游离醋酸 检查方法:酸碱滴定法、比较法

+ 2Ce3+

(亮黄色) 变为 (灰紫色)

检查方法:氧化还原滴定法、比较法 二苯胺试液一滴 硫酸铈液(0.01mol/L)滴定,消耗硫酸铈不得超过 1.0ml。

杂质限量的计算

VT ?100 % S 1.0 ? 0.002154 ? 0.10 ? 2.15% L?
Ch.P.(2010)

四、含量测定 (一)气相色谱法 内标法。 固定相: 硅酮(OV-17) 内标:正三十二烷 (二)高效液相色谱法(JP) 维生素 E:dl- a- 生育酚 固定相:十八烷基硅烷键合硅胶 流动相:甲醇-水(49 检测波长:292nm 生育酚和生育酚醋酸酯的 R>2.6 第七章 第一节 ? 甾体激素类药物的分析 基本结构与分类 甾体基本骨架 分类 肾上腺皮质激素(又称皮质激素)性激素 一、肾上腺皮质激素 结构特点: 1. 2. 3. 4. 5. 1. 2. 均有孕甾烷母核(21 个碳原子) A 环上 Δ4-3-酮 均有角甲基 D 环 17 位上有 a-醇酮基 部分 C 环 11 位上有羰基或羟基 Δ4-3-酮 共轭体系,有紫外吸收 C17 -a-醇酮基有还原性 二、雄性激素与蛋白同化激素 结构特点: 1. 2. 3. A 环为共轭体系 Δ4-3-酮 D 环 17 位上有羟基(或成酯) 雄性激素有雄甾烷母核(19 个碳原子) ;蛋白同化激素有雌甾烷母核(18 个碳原子) , C10 无角甲 基。 可供分析基团:Δ4-3-酮 三、孕激素 结构特点: 1. 2. A 环为共轭体系 Δ4-3-酮 均有角甲基 雄性激素及蛋白同化激素 孕激素 雌激素 均具有环戊烷并多氢菲母核 :1)

可供分析基团:

3. 4.
4

D 环 17 位上有甲酮基 有孕甾烷母核(21 个碳原子)

可供分析基团:Δ -3-酮、C17-甲酮基 四、雌激素 结构特点: 1. 2. 3. 4. 5. A 环为苯环,且 3 位有酚羟基(或其酯) C10 无角甲基 有雌甾烷母核(18 个碳原子) D 环 17 位有羟基(或其酯) 有的 C17-a-乙炔基 酚羟基、乙炔基

可供分析基团:

第二节 ? ?

理化性质与鉴别试验 物理常数测定法 化学鉴别法 ? ? ? 呈色反应 沉淀反应 水解产物的反应

? ?

制备衍生物测熔点 UV 法、IR 法、TLC 法、HPLC 法

一、物理常数的测定 1. 熔点 2. 比旋度 3. 吸收系数 二、化学鉴别法 (一)母核与强酸的呈色反应 强酸:H2SO4、H3PO4、HClO4、HCl 甾体激素+强酸→呈色或伴有荧光 机制:酮基的质子化反应 另:亦可以硫酸+甲醇(或乙醇)为显色试剂 ( 加水 ) 变色

与四氮唑盐的反应 条件:碱性 四氮唑盐分两种: 蓝四氮唑 BT. 产物分别呈红色和蓝色 2. 酮基的呈色反应 C3-酮(C20-酮、C11-酮)+羰基试剂→黄色的腙 羰基试剂有:异烟肼、硫酸苯肼、 2,4-二硝基苯肼 3. C17-甲酮基的呈色反应 与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛类呈色 本法对黄体酮反应专属而灵敏 P469 红四氮唑(氯化三苯四氮唑)RT.(TTC)

4. 酚羟基的反应 (1)三氯化铁呈色 雌二醇 则变为红色。 (2)重氮苯磺酸呈色 5. 乙炔基的沉淀反应 加硝酸盐 白色炔银沉淀 炔雌醇、炔诺酮 Ch.P.(2010) 【鉴别】取本品约 2ml,加硫酸 2ml 溶解,有黄绿色荧光,加三氯化铁试液 2 滴,呈草绿色,再加水稀释,

雌激素类?重氮苯磺酸盐 ??? ?? 红色沉淀

7.

酯的水解产物的反应 △4-3-酮:240nm 附近 雌激素:280nm 附近

三、UV 法

四、红外光谱法 五、TLC 法 ? ? ? ?

红外分光光度法特征性强,是鉴别本类药物的可靠手段。

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 制剂:前处理(有机提取) 斑点检出: BT、硫酸-乙醇、UV254nm 判定法:规定 Rf 值相同 薄层色谱法以比移值 Rf 作为定性的依据, 要求供试液主斑点的位臵和颜色应与对照液的主斑点相同。

六、HPLC 法 ? ? 第三节 1. 2. 3. 方法:对照品法 判定法:规定保留时间 tR 应相同 要求在含量测定项下记录的色谱图中,供试品峰的 tR 与对照品峰的 tR 一致。 特殊杂质检查 2000 年版中国药典称之为“其他甾体” 来源: 特点 (1)可能存在多个甾体杂质 (2)结构类似,但不确定 4. 方法(具有一定分离能力) TLC 法(高低浓度对比法) HPLC 法(主成分自身对照法) 二、硒的检查——二氨基萘比色法 来源 合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢 原料、中间体、异构体、降解产物 一、有关物质(其他甾体)的检查

2,3 ? 二氨基萘 环己烷 Se4? ???????? ????? A387 nm
处理:

氧瓶燃烧 盐酸羟胺 ?? ? ??? Se 6? ?? ? ??? Se 4?

三、有机溶剂残留量的检查 如:地塞米松磷酸钠中甲醇、乙醇和丙酮的检查 GC 内标法 以正丙醇为内标物质 四、游离磷酸盐的检查——磷钼酸比色法 原理 第四节 ?
3? 4 PO4 ?MoO ?? ? H 3 ?P?MoO 10 ?4 ?? nH2O
2?

(还原为)

磷钼酸蓝(钼蓝)

含量测定 比色法 1. 2. 异烟肼比色法 四氮唑比色法

? ?

UV 法 HPLC 法

一、HPLC 法 甾体激素类药物常含有结构相似的有关物质,对利用结构特征设计的比色法和 UV 法有干扰 HPLC 法特点 用样量少,灵敏度高,分离效果好,测定速度快可消除消除其他甾体的干扰 最常采用:反相色谱法(RP-HPLC)

固定相:十八烷基硅烷键合相硅胶 流动相:大部分是甲醇-水,有时加入缓冲液 也有用乙腈- 水 检 测:UV(240nm 或 280nm 附近) 定 量:多用内标法 二、UV 法 1.原理: △4-3-酮 :240nm 附近有最大吸收 皮质激素 雄性激素及蛋白同化激素 孕激素及多数口服避孕药 苯环酚羟基:280nm 附近有最大吸收 2.方法: 原料、注射剂用一定的溶剂溶解或稀释后直接测定; 片剂用一定的溶剂提取、滤过,取续滤液测定。 雌激素

(ODS 柱)

若有干扰,可用色谱法(柱色谱和薄层色谱)分离后再行紫外测定 三、 四氮唑比色法 1.四氮唑盐的种类 红四氮唑(RT)又称氯化三苯四氮唑 蓝四氮唑(BT) 2.原理 皮质激素 C17-a-醇酮基具有还原性,在强碱性溶液中能将四氮唑盐定量地还原为有色的产物。 3.测定方法(对照法) USP 用 BT,于 525nm 测定 BP 和 ChP 用 TTC(RT) ,于 485mn 测定 4.讨论 本法用于皮质激素的测定,但呈色速度、强度及稳定性受下列因素影响 1) 基团 一般认为:C11-酮基>C11-羟基;C21 羟基>C21-羟基酯化;当酯化了的基团为磷酸酯或琥珀 酸酯时,反应更慢。 2) 3) 溶剂和水分 水分使呈色慢; 醛使吸收度增加, 故应用无醛无水醇作溶剂。 但一般 95%乙醇对测定结果无影响。 碱的种类和加入顺序 最常用:氢氧化四甲基铵 先加四氮唑盐再加碱液 4) 空气氧及光线 反应及其产物对光敏感,应避光且于显色后立即测定。 TTC 法产物对氧敏感,BP 规定加试剂后充氮气。 5) 温度与时间 ChP:25℃,40-45min BP:30℃,1h 四、异烟肼比色法 C3-酮基 (主要) 3.讨论: 1) 酸的种类:HCl、H2SO4、HAc 均可,且酸与异烟肼的 mol 比为 2:1 时可获得最大吸收。 肾上腺皮质激素、 可的松>氢化可的松>醋酸氢化可的松>地塞米松磷酸钠

异烟肼 C3 ? 酮基 ????? 异烟腙(黄)

雄性激素和蛋白同化激素、孕激素

2) 3) 第八章 第一节

溶剂的选择:无水甲醇或无水乙醇 关于反应专属性: 在一定的反应条件下, 只有 C3-酮基起反应, 故本法对△4-3-酮甾体具有专属性。 巴比妥类药物的分析 基本结构与典型药物

(一)基本结构 (二)典型药物:

巴比妥 环状母核部分(决定巴比妥类药物特性) 第二节 理化性质与鉴别试验 一、 弱酸性 具有 1,3 –二酰亚胺基团,能发生酮式-烯醇式互变异构,在水溶液中可发生二级电离(注意:1,5,5 取代 的只可发生一级电离不能发生二级电离) 与强碱生成可溶性的盐类 本类药物的钠盐: 经炽灼破坏有机结构后,显钠盐的鉴别反应。例异戊巴比妥钠的鉴别 二、 水解反应 1)巴比妥类药物的水解 环状丙二酰脲 1,3-二酰亚胺基团

使湿润红色石蕊试纸变蓝 2)巴比妥类钠盐在吸湿的情况下也能水解(变质) 三、 与重金属离子的反应 丙二酰脲+Ag+(Hg2+)→白↓ +Cu2+(Co2+) →有色 条件:合适 pH 的溶液

(二银盐生成) 附录Ⅲ 一般鉴别试验 Ch.P.(2010)

丙二酰脲类 2. 与铜盐反应

碳酸钠试液

逐滴加入硝酸银试液

即生成白色沉淀, 振摇,沉淀即溶解

过量的硝酸银

试液,沉淀不再溶解

巴比妥 吡啶 ? 铜吡啶试液 ???? 类药物

↓紫色

硫喷 吡啶 ? 铜吡啶试液 ???? 妥钠
本反应可用于两类药物的区别 3. 与钴盐反应

↓绿色

巴比妥类药物 ????
4. 与汞盐反应

Co 2?

紫堇色

Hg2? NH3试液 巴比妥类药物???? ?白 ???? ?? Sol.
四、与香草醛( vanillin)的反应

巴比妥 H 2SO4 ? 香 草 醛?? ? ?? 类药物
五、取代基的反应

棕红色

1.利用不饱和取代基 (如司可巴比妥钠) 可使碘、溴及高锰酸钾等氧化剂褪色 (1)与碘或溴 TS. →褪色(加成反应) 例 司可巴比妥钠 Ch.P.(2010) 取供试品 0.1g,加水 10ml 溶解后,加碘试液(1.0mol/L)2ml,所显棕黄色应在 5min 消失。
I2 司可巴比妥? ?? 褪色

(2)在碱性溶液中与高锰酸钾(紫色)→棕色的二氧化锰(氧化反应)

KMnO4 司可巴比妥钠???? ?? 褪色( MnO2)
2.利用芳环的反应(如苯巴比妥) (1)硝化反应
3、H2SO 4 苯巴比妥(钠) ?KNO ??? ????

硝基化合物(黄色)
(2)与硫酸-亚硝酸钠的反应 →橙黄→橙红 例 苯巴比妥 Ch.P.(2010) 【鉴别】 (1)取本品约 10mg,加硫酸 2 滴与亚硝酸钠约 5mg,混合,即显橙黄色,随即转橙红色。 (3)与甲醛-硫酸的反应 →玫瑰红 例 苯巴比妥 Ch.P.(2010) 【鉴别】 (2) 取本品约 50mg, 臵试管中, 加甲醛试液 1ml, 加热煮沸, 泠却, 沿管壁缓缓加硫酸 0.5ml, 使成两液层,臵水浴中加热,接界面显玫瑰红色。 3. S 元素的反应(如硫喷妥钠)

有机破坏后,生成 S2-与 Pb2+ →PbS ↓ 六、测熔点

直接 巴 比 妥 类?? ?? 测m. p.

H? 干燥 巴比妥类钠盐 ?? ??巴 比 妥? ?? ?? 测m. p. 沉淀剂 干燥 巴 比 妥 类?? ??? 衍 生 物? ?? ?? 测m. p.
七、光谱法 1. 紫外吸收特征 pH 不同→电离级数不同→紫外吸收不同 λmax 取代类型 5,5-二取代物 1,5,5- 三取代物 pH 酸性 pH 2 无吸收 无吸收 287nm 238nm 碱性 pH 10 240nm 240nm 304nm 255nm 强碱性 pH 13 255nm 240nm

硫代巴比妥 2. IR

304nm

巴比妥类药物的鉴别几乎都采用本法 标准图谱对照法 对照品法 八、色谱法 1. 2. TLC HPLC

第三节 特殊杂质检查 一、苯巴比妥的特殊杂质检查 1. 酸度 灵敏度法 水溶液中加入甲基橙试剂不得显红色。 2. 乙醇溶液的澄清度 3. 中性或碱性物质 4. 有关物质 中性或碱性物质检查: 取本品 1.0g,臵分液漏斗中,加氢氧化钠试液 10ml 溶解后,加水 5ml 与乙醚 25ml,振摇 1 分钟, 分取醚层,用水振摇洗涤 3 次,每次 5ml,取醚液经干燥滤纸滤过,滤液臵 105℃恒重的蒸发皿中,蒸干, 在 105℃干燥 1 小时,遗留残渣不得超过 3mg。 二、司可巴比妥钠的特殊杂质检查 1. 溶液的澄清度 2. 中性或碱性物质 第四节 ? ? 含量测定 银量法 溴量法 常用方法有: 提取重量法 提取重量法 HPLC 法

? ?

酸碱滴定法 紫外分光光度法

2 适用范围只适于 3. 1) 终点指示:

5,5 – 取代巴比妥

目视浑浊法(又称自身指示终点法) Ch.P.(63)和 Ch.P.(77)采用此法 在碳酸钠溶液中用硝酸银直接滴定,以生成浑浊在 30s 内不消失为终点。简便、专属性强,但终 点难掌握,结果偏高

2)电位法 Ch.P(85)起都用此法 采用甲醇及 3%无水碳酸钠溶剂系统、银-玻璃电极系统。 作用: A. 减少目测误差 B. 避免温度变化的影响 4.例子: 异戊巴比妥钠 取本品约 0.2g,精密称定,加甲醇 40ml 使溶解,再加新配制的 3%无水碳酸钠溶液 15ml,照电 位滴定法,用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定,即得。每 1ml 硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于 24.83mg 的 C11H17N2NaO3。 (二)溴 量法(剩余回滴法) 只适于在 5 位取代基中含有双键的巴比妥类药物,以司可巴比妥钠为例: 司可巴比妥钠+ 1Br2 (定量过量)→ 二溴代司可巴比妥钠 Br2(剩余)+ 2KI → 2KBr + I2 I2 + 2Na2S2O3 → 2NaI + Na2S4O6 特点:专属性强 Ch.P.(2010)方法: 取本品约 0.1g,精密称定,臵 250ml 碘瓶中,加水 10ml 使溶解,精密加溴滴定液(0.05mol/L) 25ml 和盐酸 5ml,立即密塞并振摇 1 分钟,在暗处放臵 15 分钟后,注意微开瓶塞,加碘化钾试液 10ml,立即密 塞,摇匀后,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定,至近终点时,加淀粉指示液,继续滴定至蓝色消失,并 将滴定结果用空白试验校正,即得。每 1ml 溴滴定液(0.05mol/L)相当于 13.01mg 讨论: 1.溴滴定液(0.05mol/L)易挥发 配制 滴定时 溴酸钾+溴化钾 溴滴定液+盐酸 的 C12H17N2NaO3。

KBrO3 ? 5KBr ? 6HCl ? 3Br2 ? 6KCI ? 3H2O
2.在暗处反应 3.近终点时加淀粉指示液 *大量 I2 存在时与淀粉结合较牢

*淀粉在酸性溶液中易水解 4.“密塞” Br2、I2 易挥发 5.“滴定结果用空白试验校正” *溴滴定液的浓度不用标定 *抵消溴与碘的挥发所带来的损失 (三)非水酸量法 1)原理 弱酸性药物在非水溶液中酸性得到增强;因此当药物酸性太弱而无法在水溶液中用碱液滴 定时,可改在非水溶液中进行非水酸量法滴定。 2)滴定系统 A. B. C. 3)注意事项 A. B. 甲醇钠滴定液应尽量避免接触空气中的二氧化碳和水分,并要防止溶剂的挥发 应同时做空白试验。 溶剂:二甲基甲酰胺、甲醇、氯仿 滴定剂:甲醇钾(钠)的甲(乙)醇溶液、氢氧化四丁基铵的氯苯溶液 指示剂:麝香草酚蓝等或电位法指示终点(玻璃-甘汞电极)

(四)紫外分光光度法 1.直接紫外分光光度法 1) 2) 注射用硫喷妥钠 本 品 为 硫 喷 妥 钠 100 份 与 无 水 碳 酸 钠 6 份 混 合 的 灭 菌 粉 末 。 按 平 均 装 量 计 算 , 含 硫 喷 妥 钠 (C11H17N2NaO2S) 应为标示量的 93.0%~107.0 %。 【规格】 按 C11H17N2NaO2S 计算 (1) 0.5g (2) 1g 【含量测定】 取装量差异项下的内容物,混合均匀,精密称取适量(约相当于硫喷妥钠 0.25g ) ,臵 500ml 量瓶中,加水使硫喷妥钠溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取适量,用 0.4 %氢氧化钠溶液定量稀释制成 每 1ml 中约含 5μg 的溶液,照紫外-可见分光光度法,在 304nm 的波长处测定吸光度;另取硫喷妥对照品 适量,精密称定,加 2. 差示分光光度法 1)原理 巴比妥类药物在不同 pH 溶液中具有不同的紫外吸收性质,而杂质在不同 pH 溶液中具有相同的吸收 △A =ApH10-ApH2 △A =ApH13-ApH10 2)条件 两种溶液的浓度、测定 λ 应相同 (五)HPLC 法 (六)GC 法 0.4 %氢氧化钠溶液溶解并定量稀释制成每 1ml 中约含 5μg 的溶液,同法测定。根 据每支的平均装量计算。每 1mg 硫喷妥相当于 1.091mg 的 C11H17N2NaO2S 。 吸收系数法 对照法

C样 ?

A样 ? C对 A对


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