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用LIPO3000向细胞中转染siRNA


用 LIPO3000 向 PK-15 细胞中转染 siRNA
以 24 孔板为例。 1 转染前一天细胞消化计数, 之后细胞在 0.5 ml 不含双抗的完全培养基中正常生 长。 2 细胞的密度为 30%-50%适宜。 (注意:根据转染后细胞检测时间的长短决定细 胞密度,如果转然后需要很长时间去检测,则细胞密度适当降低,以避免细胞过 度生长导致存活性降低。 ) 3 第二天(24 到 36 小时)每孔转染方式如下: A 将 20 pmol siRNA 溶于 150 微升 Opti-MEM 无血清培养基中。 B 将 1 微升 lipo2000 溶于 150 微升 Opti-MEM 无血清培养基中,混匀室温放置 5 min。 C 将 A、B 混合放置 5 min。 4 转染期间,将 24 孔板中的培养基换成无血清培养基,每孔 400 微升。将 C 管 Mix 加入到每孔中,6 小时后换成有血清培养基。


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