当前位置:首页 >> 生物学 >>

siRNA 干扰实验步骤(贴壁细胞)


1. 转染前一天,4-5× 10* 4细胞接种在 24 孔板上, 0.5mL 含 FBS 和抗生素的 DMEM (或 Opti-MEM,其他培养基)细胞培养基。

2. 选择用于初期接种的细胞数量,应能在24小时内使细胞汇合达到70-90%。 3. 在50μl 的 DMEM(或 Opti-MEM,或其他无血清培养基)无血清培养基加入20pmol siRNA(或

0.8μg DNA),柔和混匀;

4. 混匀 lipofectamin 试剂,用 50μl 无血清的 DMEM 或 Opti-MEM,或其他无血清培养 基)稀释 1μl lipofectamin 试剂(DNA 转染时,则加入2μllipofectamin 试剂) ,轻轻混匀, 室温放置5分钟;

5. 将稀释好的 siRNA 和 Lipofectamin 试剂混合;轻柔混匀,室温放置 20 分钟 , 以便 形成 siRNA/lipofectamin (或 DNA/lipofectamin)复合物。

6. 将 100μl siRNA/lipofectamin(或 DNA/lipofectamin)复合物加到含有细胞和培养基的 培养板的孔中,来回轻柔摇晃细胞培养板板。

7. 细胞在 CO2培养箱中37℃ 温育24h-48h 后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株 比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。


相关文章:
siRNA实验方法和设计常见问题解答
A:1)对于贴壁细胞,推荐采用转染试剂转染即可;2)对于难转染的细胞的转染,如何...Q:为什么说阳性对照在 RNA 干扰实验中很重要? A:阳性对照作为一个实验系统检查...
RNA干扰步骤
RNA干扰步骤_计算机硬件及网络_IT/计算机_专业资料。RNA干扰步骤一...方法高 10 到 100 倍,最近,贴 壁细胞的电融合还被用来研究细胞融合时细胞的...
Lipofectamine 2000细胞转染实验步骤 注意事项
细胞转染实验步骤 注意事项 2010-07-10 16:16 ...另外建议用 DMRIE-C 将 RNA 转染入贴壁细胞。它...无血清培养基表达蛋白,因为血清蛋白会干扰下 游表达...
siRNA小干扰RNA 转染程序
siRNA干扰RNA 转染程序_医学_高等教育_教育专区。小干扰RNA的转染步骤siRNA...核酸(si、DNA、 )的体内导入试验 5.贴壁细胞和悬浮细胞转染 (四)SiMi 特点...
吉玛RNA手册
贴壁细胞转染程序 悬浮细胞 siRNA 转染程序 10 H....RNAi 实验原理 RNA 干扰(RNA interfering,RNAi)现象...存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。...
体内实验研究 的常见问题及解答
选择 siRNA 的用量和浓度时应该考虑以下因素:...对贴壁细胞来说脂质体转染技术是最为常用的方法,而...锐博能提供许多预先合成的用于 RNA 干扰实验的对照双...
在“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验中,正确的操作步骤是( )
正确答案及相关解析 正确答案 C 解析 解:“观察DNA和RNA细胞中的分布”的实验步骤:取口腔上皮细胞制片→水解→冲洗涂片→染色→观察. 故选:C....
Trizol法提取RNA实验步骤
Trizol法提取RNA实验步骤_生物学_自然科学_专业资料。Trizol法使用步骤一、分离...五、从细胞中提取总RNA 1) 培养贴壁细胞:不须消化,可直接用Trizol进行消化、...
观察DNA和RNA在细胞中的分布实验中,正确实验步骤是( )_...
正确答案 D 解析 解:由以上分析可知,观察DNA和RNA细胞中的分布实验中,正确实验步骤是:取口腔上皮细胞→制片→水解→冲洗涂片→染色→观察. 故选:D.最新...
EDU实验步骤
方面的研究,尤其适合进行 siRNA、miRNA、小分子化合物及药物的细胞 增殖筛选实验...荧光显微镜检测方法(以 96 孔板,A549 贴壁细胞为例) 细胞培养 取对数生长期...
更多相关标签:
sirna细胞转染步骤 | sirna干扰 | sirna干扰原理 | sirna干扰时间 | sirna干扰技术 | sirna转染步骤 | sirna转染的实验步骤 | lip3000转染sirna步骤 |