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专题二 第2节 动物细胞工程课件 新人教版选修3


2.2 动物细胞工程

考纲

三年16考 2.细胞融合与单克隆抗体

高考指数:★★★★★ Ⅰ Ⅱ

考情

1.动物的细胞培养与体细胞克隆

2014年(3考):新课标全国卷ⅠT40,浙江T3,福建T33 三年 考题

2013年(6考):山东T35,江苏T13,福建T33,浙江T6,海南
T31,重庆T2 2012年(7考):山东T35,江苏T9、T22,广东T2,福建T32, 浙江T31,安徽T31

1.考查内容:主要是动物细胞培养、细胞融合和单克隆抗体

的制备及应用。
考情 2.考查方式:单独考查动物细胞融合和动物细胞培养技术; 播报 常结合制备单克隆抗体过程考查原理的应用,还可与基因工

程和胚胎工程综合考查。
3.考查题型:以非选择题为主,属中档题。

【知识梳理】
一、动物细胞培养

1.操作流程:
组织 单个细胞的悬浮液 原代 培养 _____ 传代 培养 _____

2.培养条件: 培养液 和所有培养用具进行无菌处理, (1)无菌、无毒的环境:对_______ 抗生素 ,定期更换培养液以_____________ 清除代谢产物 。 添加_______ 血清、血浆 等一些 (2)营养:除正常的有机和无机营养外,加入___________ 天然成分。 36.5±0.5℃ 哺乳动物),pH为 (3)适宜的温度和pH:温度为____________( 7.2~7.4 。 _________ 5%CO2 的混合气体,其中后者的作用是 (4)气体环境:含95%空气加_____

维持培养液的pH 。 _______________ 有毒物质 ,医学研究。 3.应用:生物制品的生产,检测_________

二、动物体细胞核移植技术和克隆动物 细胞核 移入一个已经去掉细胞 1.动物核移植:将动物一个细胞的_______
卵母细胞 中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚 核的_________ 动物个体 。 胎最终发育为_________

2.过程:
供体细胞培养

去核 重组细胞
胚胎移植

供体

全能性 。 3.原理:动物体细胞核具有_______ 遗传物质 基本相同的个体。 4.结果:获得与供体_________ 5.克隆动物:用核移植方法得到的动物。

三、动物细胞融合 细胞膜的流动性 。 1.原理:_______________ 灭活的病毒 、电激等。 2.融合方法:聚乙二醇(PEG)、___________

有性杂交方法 的局限,使_________ 远缘杂交 成为可能, 3.意义:突破了_____________ 单克隆抗体 开辟了新途径。 也为制造___________

四、单克隆抗体 1.制备过程:

杂交瘤细胞

能分泌所需
抗体

灵敏度高 ,并可大量制备。 2.优点:特异性强、_________ 诊断试剂 ,用于治疗疾病和_________ 运载药物 。 3.用途:作为_________

【速记卡片】

1.动物细胞培养过程:
(1)分散细胞方法:组织块剪碎,用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理。

(2)生长特点:贴壁生长、接触抑制。
(3)分瓶。 (4)原代培养:动物组织消化后的初次培养。 (5)传代培养:分瓶继续培养。

2.动物细胞培养的条件: (1)无菌、无毒的环境。

(2)营养:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清、
血浆等。 (3)温度和pH:与动物体温相近,pH为7.2~7.4。 (4)气体环境:CO2的主要作用是维持培养液的pH。 3.动物细胞融合: (1)原理:细胞膜的流动性。 (2)融合方法:聚乙二醇(PEG)、灭活的病毒、电激等。

4.单克隆抗体制备:

(1)涉及的三种细胞作用不同。
B淋巴细胞:能分泌单一抗体,但不能无限增殖。

骨髓瘤细胞:能大量增殖,但不能产生抗体。
杂交瘤细胞:既能产生单一抗体,又能大量增殖。 (2)两次筛选的目的不同。 第一次筛选是得到杂交瘤细胞。 第二次筛选是得到能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

考点一

植物组织培养、动物细胞培养和细胞核移植

1.三者比较: 项目 原理 关键 环节 植物组织培养 植物细胞的 全能性 细胞的脱分化和 再分化 动物细胞培养 细胞增殖 细胞增殖和癌变 动物体细胞核移植 动物细胞核的全能 性 细胞核融合、细胞 分化

项目 结果

植物组织培养 与外植体相同的个体 ①植株快速繁殖 ②脱毒作物苗的培养 ③人工种子 ④细胞产物工厂化生 产 ⑤转基因植物的培育

动物细胞培养 相同分化程度 的细胞群 ①生产生物制

动物体细胞核移植 获得克隆动物 ①加速良种繁育 ②保护濒危物种


②医学研究 ③检测有毒物

③生产医用蛋白
④作为异种移植的供 体

应用



⑤用于组织器官的移


2.动物细胞核移植的疑难解析:

(1)卵母细胞选择时期及原因:MⅡ中期的卵母细胞,此时具备受精能
力,细胞质中合成与分裂、分化有关的物质能刺激融合后重组细胞进

行分裂分化,形成重组胚胎。
(2)选卵细胞作为受体细胞的原因。 ①卵细胞大,易于操作。 ②卵黄多,营养丰富,为发育提供充足的营养。 ③能激发重组细胞分裂分化。

(3)供体细胞:取供体动物的体细胞培养,一般选用传代10代以内的

细胞,因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型,保证了供
体细胞正常的遗传基础。

(4)动物体细胞不能经培养直接发育成完整个体的原因:动物体细胞
的全能性受到限制。 (5)该过程用到的技术手段:动物细胞培养、动物细胞融合、早期胚 胎培养和胚胎移植。

【高考警示】动物细胞培养和核移植技术的理解误区

(1)动物细胞培养中两次使用胰蛋白酶的作用不同:第一次用胰蛋白
酶处理剪碎的组织使之分散成单个细胞,第二次使贴壁细胞从瓶壁上

脱落下来。
(2)核移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本可能不同。 ①克隆动物细胞质基因来源于另一个亲本,与植物组织培养不同(来 自一个亲本),即克隆动物遗传物质来自两个亲本。 ②在发育过程中可能发生基因突变、染色体变异导致性状改变。 ③外界环境条件的影响引起不可遗传的变异。

【考题回访】

1.(2015·银川模拟)回答下列有关动物细胞培养的问题:
(1)在动物细胞培养过程中,当贴壁细胞分裂生长到细胞表面______ 时,细胞会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的 此时,瓶壁上形成的细胞层数是 分离下来,需要用酶处理,常用的酶是 。

。要使贴壁的细胞从瓶壁上 。

(2)随着细胞传代次数的增多,绝大部分细胞分裂停止,进而出现

的现象;但极少数细胞可以连续增殖,其中有
些细胞会因遗传物质发生改变而变成 细胞,这种细胞

的黏着性

,细胞膜表面蛋白质(糖蛋白)的量



(3)用某种大分子染料对细胞进行染色时,观察到死细胞被染色, 而活细胞不染色,原因是___________________________________ ________________________________________________________。

(4)检查某种有毒物质是否能改变细胞染色体的数目,最好选用分裂
到 期的细胞用显微镜进行观察。

(5)在细胞培养过程中,通常在
种条件下,细胞中

条件下保存细胞。因为在这

的活性降低,细胞新陈代谢的速率降低。

(6)给患者移植经细胞培养形成的皮肤后,发生了排斥现象,这是因 为机体把移植的皮肤当作 进行攻击。

【解题指南】解答本题需明确三个方面: (1)细胞贴壁生长与接触抑制。 (2)胰蛋白酶和糖蛋白的作用。 (3)器官移植与排斥反应。

【解析】(1)在动物细胞培养过程中,细胞会表现出接触抑制现象, 此时是单层细胞。用胰蛋白酶处理可以使贴壁的细胞从瓶壁上分离下 来。 (2)随着细胞传代培养代数的增多,绝大部分细胞分裂停止,进而出 现衰老甚至死亡的现象,但极少数细胞可以连续增殖,有些细胞会因

遗传物质改变而变成不死性细胞,这种细胞细胞膜表面糖蛋白减少,
细胞黏着性降低。

(3)由于活细胞的膜具有选择透过性,大分子染料不能进入活细胞内,
而死细胞的细胞膜丧失了选择透过性,大分子染料能够进入死细胞内 而着色。

(4)由于细胞分裂中期染色体形态固定、数目清晰,因此最好选用分

裂到中期的细胞用显微镜观察染色体数目。
(5)由于在冷冻、超低温或液氮条件下,细胞中酶的活性降低,细胞 新陈代谢的速率降低,通常在此条件下保存细胞。 (6)机体把移植的皮肤当作抗原攻击,会发生排斥现象。

答案:(1)相互接触 胰蛋白酶

接触抑制

单层(或一层) 不死性 降低 减少

(2)衰老甚至死亡

(3)活细胞的膜具有选择透过性,大分子染料不能进入活细胞内,故
活细胞不能着色(或死细胞的膜丧失了选择透过性,大分子染料能够

进入死细胞内而着色)
(4)中 (5)冷冻(或超低温、液氮) 酶 (6)抗原

2.(2015·安徽名校联考)如图所示是利用现代生物工程技术治疗遗传

性糖尿病(基因缺陷导致胰岛B细胞不能正常合成胰岛素)的过程设计
图解,请据图回答下列问题:

(1)图中①、②所示的结构分别是





(2)图中③、④所示的生物工程技术分别是



,此外图示过程还应用的工程技术有_______(只需写一

种) 。
(3)过程③通常用去核卵母细胞做受体细胞的原因除了它体积大、 易操作外,还因为 。

(4)过程④通常用②作受体细胞的原因是这些细胞没有分化, 具有 ,可以定向诱导分化成各类细胞、组织和器官。 。 。

(5)过程④的完成需要用到的基因操作工具有 (6)图示方法与一般的异体移植相比最大的优点是

【解析】图中①~④依次为细胞核、内细胞团、核移植技术、转基因 技术。图中涉及的技术包括核移植技术、早期胚胎培养 (动物细胞培 养)、转基因技术、胚胎干细胞移植等。

答案:(1)细胞核 (2)核移植技术

内细胞团 转基因技术 细胞培养(早期胚胎培养、胚胎干细胞

移植、显微操作技术等) (3)营养物质丰富且含有促进细胞核全能性表达的物质

(4)全能性
(5)限制性核酸内切酶、DNA连接酶和载体 (6)没有排斥反应

【加固训练】现有A和B两个肉牛品种,A品种牛的细胞组成可表示为 A细胞核、A细胞质,B品种牛则为B细胞核、B细胞质。 (1)如果要获得一头克隆牛,使其细胞由A细胞核和B细胞质组成,基 本步骤是:从A品种牛体内取出体细胞,进行体外培养,然后再从培

养细胞中取出

注入B品种牛的

卵母细胞,经过某种
,将该胚胎移

刺激和培养后,可形成胚胎,该胚胎被称为 入代孕母牛的 中,通过培育可达到目的。

(2)克隆牛的产生说明

具有全能性。克隆牛的性状主要表现

品种牛的特征。由A、B两品种牛杂交得到的牛与克隆牛相
比,杂交牛细胞核的遗传物质来自 个亲本,细胞质来自 (填“相

性亲本,克隆牛和杂交牛的遗传物质组成 同”或“不同”)。

【解析】(1)依据题意可知,要获得由A细胞核和B细胞质组成的重组 细胞,就要提取A细胞核然后与去掉细胞核的B细胞质进行重组,得到 重组细胞,进一步培养得到重组胚胎,再进行胚胎移植,移植到代孕 母牛的子宫里进行培育。 (2)克隆动物利用的是动物细胞细胞核的全能性,得到的新个体的性

状主要由细胞核决定,与供核母牛的性状基本一致,杂交牛是由精子
和卵细胞融合得到受精卵,细胞核来自两个亲本,由于精子含有很少 的细胞质,受精卵的细胞质主要来自卵细胞,所以杂交牛和克隆牛的 遗传物质是不同的。

答案:(1)细胞核
(2)动物体细胞核

去核
A 两

重组胚胎
雌 不同

子宫

考点二

动物细胞融合、单克隆抗体

1.植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较: 比较 项目 原理 融合前 处理 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性、细胞的全 能性 除去细胞壁 纤维素酶和果胶酶 动物细胞融合 细胞膜的流动性、细胞的增 殖 使细胞分散开 胰蛋白酶

使用 的酶

比较 项目 诱导 手段 结果 应用 意义

植物体细胞杂交 物理法:离心、电激、振动 化学法:聚乙二醇等试剂诱 导 杂种植株 培育植物新品种

动物细胞融合 除物理法和化学法外,也可 用灭活的病毒诱导 杂交细胞 主要用于制备单克隆抗体

突破远缘杂交不亲和的障碍,打破了生殖隔离,扩展了杂 交的亲本组合

相同点

原生质体融合原理相同,原生质体融合的方法相似

2.单克隆抗体的制备:

【高考警示】植物体细胞杂交和动物细胞融合过程中所选酶和结果的

辨析
(1)植物体细胞杂交与动物细胞融合中酶的作用对象不同,纤维素酶

和果胶酶作用于细胞壁,而胰蛋白酶作用于细胞间的蛋白质。
(2)植物杂交细胞在激素诱导下能表达出全能性,但动物杂交细胞的 全能性不能表达。 (3)取相应B淋巴细胞前必须先注射相应抗原,否则不能获得单克隆抗 体。

【考题回访】

1.(2014·新课标全国卷Ⅰ)某研究者用抗原(A)分别免疫3只同种小鼠
(X、Y和Z),每只小鼠免疫5次,每次免疫一周后测定各小鼠血清抗体

的效价(能检测出抗原抗体反应的血清最大稀释倍数),结果如图所示。
若要制备杂交瘤细胞,需取免疫后小鼠的B淋巴细胞(染色体数目40 条),并将该细胞与体外培养的小鼠骨髓瘤细胞(染色体数目60条)按 一定比例加入试管中,再加入聚乙二醇诱导细胞融合,经筛选培养及 抗体检测,得到不断分泌抗A抗体的杂交瘤细胞。

回答下列问题: (1)制备融合所需的B淋巴细胞时,所用免疫小鼠的血清抗体效价需达 到16 000以上,则小鼠最少需要经过 次免疫后才能有符合

要求的。达到要求后的X、Y、Z这3只免疫小鼠中,最适合用于制备B 淋巴细胞的是 小鼠,理由是 。

(2)细胞融合实验完成后,融合体系中除含有未融合的细胞和杂交

瘤细胞外,可能还有_____________________________________
,体系中出现多种类型细胞的原因是___________

_______________________________________________________。
(3)杂交瘤细胞中有 条。 (4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后都不能存活,原因 是 。 个细胞核,染色体数目最多是

【解题指南】

(1)题干关键词:“效价”“杂交瘤细胞”“传代培养”。
(2)隐含信息:柱形图中效价越高,能检测出抗原抗体反应的血清最 大稀释倍数越大,说明免疫后小鼠的 B淋巴细胞产生抗体的能力越强。 (3)关键知识:制备单克隆抗体的技术流程和动物细胞体外培养的过 程。

【解析】本题考查制备单克隆抗体的相关知识。 (1)据图中数据分析,第四次注射后Y、Z小鼠的血清抗体效价均达到 16 000以上,免疫后小鼠Y的B淋巴细胞产生抗体效价最高,最适用于 制备单克隆抗体。 (2)B淋巴细胞与骨髓瘤细胞混合在一起融合时,可能发生 B淋巴细胞 之间的融合,骨髓瘤细胞之间的融合和B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,

故体系中会出现多种类型的细胞。

(3)杂交瘤细胞形成后,小鼠的B淋巴细胞核与其骨髓瘤细胞核会融合 形成一个细胞核。染色体可达100条,有丝分裂后期染色体数目最多 为200条。 (4)未融合的B淋巴细胞经多次传代培养后,仍然不是能恶性增殖的细 胞,分裂次数是有限的。

答案:(1)四

Y

Y小鼠的抗体效价最高

(2)B淋巴细胞相互融合形
细胞融合是随机的,没

成的细胞,骨髓瘤细胞相互融合形成的细胞 有特异性且融合率达不到100% (3)1 200 (4)不能无限增殖

2.(2015·潍坊模拟)人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养 层细胞分泌的一种糖蛋白,制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。 如图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图,请分析回答问题。

(1)制备单克隆抗体过程中要用到 技术。 (2)制备单克隆抗体过程中,给小鼠注射的HCG相当于





使小鼠产生分泌相应
疫中的 免疫。

的淋巴细胞,此过程属于特异性免

(3)在细胞内DNA的合成一般有两条途径,主要途径是在细胞内由糖 和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,而氨基嘌呤可以阻断此途径。

另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下,经酶的
催化作用合成DNA,而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。 ①利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分,其 中添加的 具有筛选杂交瘤细胞的作用。 。

②最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是

(4)此过程生产的单克隆抗体可以与__________________________ 特异性结合,从而诊断早孕。

【解题指南】解答本题的关键:
(1)明确单克隆抗体的制备过程。 (2)熟知在培养基中能够生长增殖的细胞是具有 DNA复制途径的细胞。

【解析】(1)制备单克隆抗体过程中要用到动物细胞培养和动物细胞 融合技术。(2)给小鼠注射HCG,使小鼠进行体液免疫,产生能分泌抗 体的B淋巴细胞。(3)骨髓瘤细胞的DNA合成只有一条途径,在培养基 中加入氨基嘌呤,阻断了骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合体的增殖。杂 交瘤细胞有两条合成DNA的途径,因此在选择培养基上杂交瘤细胞能

生存并无限增殖。B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交瘤细胞既能
无限增殖,又能产生单一抗体。(4)此单克隆抗体是针对人绒毛膜促 性腺激素(HCG)作抗原产生的,可以与人绒毛膜促性腺激素 (HCG)特 异性结合。

答案:(1)动物细胞培养 (2)抗原 抗体 体液

动物细胞融合 (3)①氨基嘌呤

②能无限增殖并分泌特异性抗体 (4)人绒毛膜促性腺激素(或HCG)

【延伸探究】题中(3)经过氨基嘌呤处理后,能够存活的细胞类型有 哪些? 提示:由于骨髓瘤细胞没有DNA合成的辅助途径,而氨基嘌呤阻断主 要途径,所以经处理后,能够存活的细胞是 B淋巴细胞和B淋巴细胞与 骨髓瘤细胞融合后的细胞。

【加固训练】如图为制备单克隆抗体和多克隆抗体的示意图,据图回

答下列问题:

(1)图中向小鼠注射包含多种抗原决定簇的抗原后,所获得的免疫

抗血清实际上是含有

(填写抗体的名称)的混合

物,这种方法制备的多克隆抗体不仅产量低、而且纯度低。

(2)图中选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞,说明细胞
膜具有 ,如果仅考虑细胞的两两融合,其融合细胞有 种类型。

(3)图中两次筛选的目的不同,其中筛选①的目的是筛选出 筛选②的目的是筛选出 。



(4)科学工作者正在研究的用于治疗癌症的“生物导弹”就



。用“生物导弹”治疗癌症的方法优

于化疗的原因是_________________________________________

_______________________________________________________。

【解析】(1)结合题图可看出获得的免疫抗血清实际上是 Ab1、Ab2、

Ab3、Ab4多种抗体的混合物。
(2)动物细胞融合的过程体现了细胞膜的流动性;仅考虑两个细胞的

融合,可得到B淋巴细胞+B淋巴细胞、骨髓瘤细胞+骨髓瘤细胞及B淋
巴细胞+骨髓瘤细胞3种类型的融合细胞。 (3)在单克隆抗体的制备过程中,筛选①的目的是筛选出杂交瘤细胞, 筛选②的目的是获得能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。

(4)把单克隆抗体跟抗癌药物相结合制成“生物导弹”,注入患者体

内,借助单克隆抗体的导向作用,能将药物定向带到癌细胞所在位置,
在原位杀死癌细胞。这样既不损伤正常细胞,又减小了用药剂量,而

且疗效高、毒副作用小。
答案:(1)Ab1、Ab2、Ab3、Ab4 (3)杂交瘤细胞 (2)流动性 3

能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 可以原位杀死癌细胞,还不损伤正

(4)单克隆抗体上连接抗癌药物

常细胞,且用药剂量小,疗效高、毒副作用小


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