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实验四 探究影响酶活性的因素


实验四 一.实验目的:

探究影响酶活性的因素

1.探究不同温度和 PH 对过氧化氢酶活性的影响。 2.培养实验设计能力。 二.方法步骤: 提出问题→作出假设→设计实验→(包括选择实验材料、选择实验器具、确定实验步骤、设 计实验记录表格)→实施实验→分析与结论→表达与交流。 实例 1:比较过氧化氢酶和 Fe3+的催化效率 一).实验原理: 鲜肝提取液中含有过氧化氢酶,过氧化氢酶和 Fe3+都能催化 H2O2 分解放出 O2。经计算, 质量分数为 3.5%的 FeCl3 溶液和质量分数为 20%的肝脏研磨液相比,每滴 FeCl3 溶液中的 Fe3+数,大约是每滴肝脏研磨液中过氧化氢酶分子数的 25 万倍 二)方法步骤: 方法步骤: 步骤 取 4 支洁净试管,编号,分 别加入 2mL H2O2 溶液 将 2 号试管放在 900C 左右 的水浴中加热,观察气泡冒 出情况,与 1 号对照 向 3 号、4 号试管内分别滴 入 2 滴 FeCl3 溶液和 2 滴肝 脏研磨液,观察气泡产生情 况 肝脏研磨 液必须是 新鲜的 不可用同 一支滴管 由于酶具有高效性,若滴入的 FeCl3 溶液中混 有少量的过氧化氢酶,会影响实验准确性 注意问题 不让 H2O2 接触皮肤 解释 H2O2 有一定的腐蚀性

因为过氧化氢酶是蛋白质,放置过久,可受细 菌作用而分解,使肝脏组织中酶分子数减少, 活性降低

肝脏在制 成研磨液

研磨可破坏肝细胞结构,使细胞内的酶释放出 来,增加酶与底物的接触面积

2-3min 后, 将点燃的卫生香 分别放入 3 号和 4 号试管内 液面的上方,观察复燃情况

放卫生香 时,动作要 快,不要插 到气泡中

现象:3 号试管产生气泡多,冒泡时间短,卫 生香猛烈复燃,4 号试管产生气泡少,冒泡时 间长,卫生香几乎无变化 避免卫生香因潮湿而熄灭

实例 2:温度对酶活性的影响 一)实验目的: 1.初步学会探索温度对酶活性的影响的方法。 2.探索淀粉酶在不同温度下催化淀粉水解的情况。 二)实验原理: 1.淀粉遇碘后,形成紫蓝色的复合物。 2.淀粉酶可以使淀粉逐步水解成麦芽糖和葡萄糖(淀粉水解过程中,不同阶段的中间产物 遇碘后,会呈现红褐色或红棕色。)麦芽糖和葡萄糖遇碘后不显色。 注:市售 a-淀粉酶的最适温度约 600C 三)方法步骤:

操作 取 3 支试管,编上号,然后分 别注入 2mL 可溶性淀粉溶液 另取 3 支试管,编上号,然后 分别注入 1mL 新鲜淀粉酶溶 液 将装有淀粉溶液和酶溶液的试 管分成 3 组, 分别放入热水 (约 600C)、沸水和冰块中,维持 各自的温度 5min 分别将淀粉酶溶液注入相同温 度下的淀粉溶液中,摇匀后,

注意问题

解释

不能只用不同温度 处理淀粉溶液或酶 溶液

防止混合时,由于两种溶液的温度不 同而使混合后温度发生变化,反应温 度不是操作者所要控制的温度,影响 实验结果。

保持各自温度时间 不能太短

淀粉酶催化淀粉水解需要一定时间

维持各自的温度 5min 在 3 支试管中各滴入 1-2 滴碘 液,摇匀后观察这 3 支试管中 溶液颜色变化并记录 用表格的形式显示实验步骤 序号 加入试剂或处理方法 试管 A 1 可溶性淀粉溶液 新鲜淀粉酶溶液 2mL / 600C B 2mL / 1000C C 2mL / 00C a / 1mL 600C b / 1mL 1000C c / 1mL 00C 碘液不能滴加太多 防止影响实验现象的观察

2 3

保温 5min 试管, 将 a 液加入到 A 试管,b 液加入 试管, 试管中, 到 B 试管, 液加入到 C 试管中, c 摇匀

4 5 6

保温 5min 滴入碘液, 滴入碘液,摇匀 观察现象并记录

600C 2滴

1000C 2滴

00C 2滴

实例 3:PH 值对酶活性的影响 操作步骤:用表格开式显示实验步骤:(注意操作顺序不能错 操作步骤:用表格开式显示实验步骤:(注意操作顺序不能错) :(注意操作顺序不能 序号 加入试剂或处理方法 试管 1 1 2 3 注入新鲜的淀粉酶溶液 注入蒸馏水 注入氢氧化钠溶液 1mL 1mL / 2 1mL / 1mL 3 1mL / /

4 5 6 7 8 9

注入盐酸 注入可溶性淀粉溶液

/ 2mL

/ 2mL

1mL 2mL

600C 水浴保温 5min 加入斐林试剂, 加入斐林试剂,边加边振荡 2mL 2mL 2mL

水浴加热煮沸 1min 观察 3 支试管中溶液颜色变化变记录


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